人血管内皮生长子165克隆表达及其生物学功能的研究.pdfVIP

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人血管内皮生长子165克隆表达及其生物学功能的研究

人血管内皮生长因子165克隆表达 及其生物学功能的研究 硕士研究生:张明辉 指导教师:安广宇 教授 专业名称:内科学 摘 要 目的:构建人血管内皮生长因子165(Vascularendothelial growth factor VEGFl65真核表达载体并将其转入人慢性髓系白血病急变细胞株 通过自分泌途径对肿瘤生长发挥作用,从而为临床上恶性血液病抗血 管新生治疗的部分机理提供实验依据。 码序列(不包含前面8 lbp的信号肽序列及终止密码子),将其插入质 均用EcoR/和SalI双酶切,回收纯化目的基因片段与表达载体,构建 BL2 Resin纯化, 1(DE3)pLysS,IPTG诱导表达,表达产物用Ni.NTA SDS.PAGE及WesternBlot鉴定重组蛋白。用RT-PCR法从人白血病细 I 响。 结果:1.测序结果示扩增的VEGFl65序列与文献报道相符。 3.Western Blot分析表明重组蛋白可与兔抗人VEGF单克隆抗体特异性 Blot均见亮度明显增强的表达 K562(K562/M)千N比,RT-PCR和Western 亡率分别为5.1%、14.9%和12-3%、35.8%。 结论:成功克隆了人血管内皮生长因子165DNA片段,并在大肠 其增殖,抑制其凋亡。 关键词:血管内皮生长因子 克隆 表达 K562 增殖 凋亡 三氧化二砷 onthe and Study Cloning/Expression Biological Functi onsof Vascular endothelial factor165 growth Postgraduate:ZhangMinghui Supervisor:Prof.An Guangyu medicine Specialty:Internal Abstract constructa vectorofvascular objeetive:To procaryotic expression endothelial factor 1 1 to 1 growth 65(VEGF VEGF65in 65)a

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