- 1、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 5、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
人脐带mscs脊髓生物支架相容性的体外研究
中文摘要
人脐带MSCs与脊髓生物支架相容性的体外研究
摘 要
目的:使受损脊髓功能得到恢复依然是再生医学的难题。
细胞移植被普遍认为是最有希望治疗脊髓损伤的策略之一,
但其前景取决于移植物与脊髓断端融合,并有足够的轴突再
生并跨过脊髓建立有效地连接。为此,利用组织工程支架材
料、种子细胞等工程学技术重建脊髓的方法,是近年来研究
的热点n1。
我们先前的研究业已表明应用化学萃取的家犬脊髓神经
基膜样组织具有三维网状结构,可为人脐带间充质干细胞分
化、增殖提供良好载体。最近,我们利用这种质地柔软的脊
髓神经基膜样组织作为髓芯,外面包被用天然生物膜材料(国
旋凸梁式圆管,制成脊髓生物支架。本实验目的是对这种新
umbilicalcord
型脊髓支架与人脐带间充质干细胞(human
stem
mesenchymal
究, 为横贯性脊髓损伤动物模型及临床应用奠定基础。
方法:1、脊髓生物支架内髓芯的制备:切取幼犬胸段脊
箱中过夜;蒸馏水浸浴3h后放入40mM/L脱氧胆酸钠蒸馏水
溶液中,置4C冰箱12h。以上步骤重复4次。萃取后的髓芯
分为三部分:大部分经无菌试验处理后置4℃冰箱待用,部分
行电镜及冰冻切片观察,剩余部分通过真空冷冻干燥处理后
保存。
中文摘要
2、人脐带间充质干细胞培养:取足月妊娠剖宫产健康胎
儿的脐带,以PBS充分冲洗,剔除脐带动、静脉,将其余的
脐带问质组织切割成直径约1ram大小的组织块,在含有20
%的胎牛血清、2mM左旋谷氨酰氨(L-Glu)、100I7/ml青霉
代培养5—7天后,显微镜下可见大量细胞自组织块中游出,
向外呈放射状贴壁生长。待10天左右,细胞达到80%一90
%汇合后,加入0.2%胰酶消化传代。收集第三代MSCs经流
式细胞学检测细胞表面抗原证实其为脐带间充质干细胞后冻
存待用。
3、将用天然生物膜材料做成的带有脑脊液通道的螺旋凸
梁式圆管部分切开,作断面及内表面扫描电镜观察,剩余部
分圆管套在已制备好的髓芯的上,置4℃冰箱待用。
4、冻存的人脐带MSCs复苏后与脊髓生物神经支架相容
性研究:对冻存的人脐带MSCs复苏使细胞密度达到1×10
/ml,分点注入支架内,置入干细胞一支架体外培养液中培养,
扫描、透射电镜观察人脐带MSCs在不同时间点的生长发育
情况。
结果:1、经组织块原代培养约5天后,可见大量细胞自
组织块游出,于周边向外贴壁呈放射状生长,形态较均一,
呈长梭形。10天达到80%--90%汇合,镜下可见细胞胞浆丰
富,轴突伸长,多角状。消化后以1:2—1:3的比例传代细
胞,接种约30分钟后细胞迅速贴壁,经换液完全汇合时镜下
可见细胞排列紧密,无序生长,经传代培养3代后细胞形态
未见明显变化,经流式细胞学检测MSCs的标志抗原CD29、
2
中文摘要
特性。
2、化学萃取后的脊髓依然呈长扁圆形,但直径有所增粗,
后正中裂距离加宽,乳白色、质软。HE染色可见经化学方法
萃取的脊髓横切片中无任何细胞,质地较致密,内可见蜂窝
状网格。扫描及透射电镜可见去细胞髓芯的髓鞘、细胞等结
构均消失,整个视野由板层样结构组成,神经纤维间基质和
基底膜形成圆形较规则、均一的腔隙。特别是扫描电镜支架
中存在神经元被化学萃取后残留的“空穴”,其大小与神经元
仍呈长扁圆形,但直径变小,硬度有所增加,断面可见组织
块更加致密。
3、天然生物膜材料肉眼下为带有脑脊液通道的螺旋凸梁
式圆管状。生物膜圆管切开后,扫描电镜观察断面及内表面。
断面可见该生物膜圆管呈分层状,由数层膜压制而成,而且
部分膜之间夹有数层较厚的材料。内表面在电镜下观察可见
胶原样结构呈蜂窝状。
4、人脐带MSCs接种于包被生物膜圆管的脊髓生物支架
内行体外条件养后,取48、72、96小时三个时问段,分别行
冰冻切片HE染色、扫描电镜观察。冰冻切片HE染色见萃取
的脊髓生物支架中有细胞在蜂窝样结构内生长,细胞呈点状、
星芒状散居于间质之间
您可能关注的文档
- opg及力学因在激素性股骨头坏死中的作用机制.pdf
- osahs人群眠姿势与屈光参差的关系及mmp-2、mmp-9在慢性间断性缺氧小鼠角膜、巩膜的表达和意义.pdf
- osahs及oahs合并高血压病患者脂质过氧化反应的研究.pdf
- p-ser&l;'118>-erα在乳腺癌组织中的表达及其意义.pdf
- p-糖蛋白在慢癫痫大鼠脑组织的表达及药物干预的研究.pdf
- osahs及oahs合并冠心病患者血清il-6和crp水平的变化.pdf
- p16<#39;ink4a>在宫颈病变中的研究.pdf
- p16、bcl2、cyclind1在膀胱移行细胞癌中的表达及意义.pdf
- p16基因甲基与人脑胶质瘤临床病理特征关系的研究.pdf
- p73α与143-3σ在不同乳腺癌细胞系中的表达及其相互作用的研究.pdf
文档评论(0)