山苍子油对皮肤菌的药物敏感性实验及临床实验.pdfVIP

中 文 摘 要 山苍子油对皮肤癣菌的药物敏感性实验及临床实验 摘 要 目的:由皮肤癣菌感染在临床生立引起的各种浅部真菌病 是皮肤科常见病、多发病，临床上多用抗真菌药物来治疗， 但是耐药菌株的不断出现及高的复发率始终困扰着患者和 医务工作者，同时也促使广大科研工作者不断寻找新的广 谱、高效、廉价的抗真菌药物。近年来，中药抗真菌药物取 得了较大的进步，筛选出了多种有抗真菌活性的中药，山苍 子油就是其中一种。本次实验参照美国国家临床实验标准化 委员会 (NCCLS)推荐的 酵《母菌的液基稀释法抗真菌药物 敏感实验》，测定_!!J苍子油对四种皮肤癣菌的最低抑菌浓度 (MIC)电镜下观察药物作用前后石膏样毛癣菌超微结构的 改变，并将山苍子油制成霜剂，临床应用于浅部真菌病的治 疗，观察疗效。本次实验在测定山苍子油对四种皮肤癣菌的 最低抑菌浓度时将菌丝置于组织研磨器中研磨，通过血细胞 计数板计数确定菌悬液的浓度，解决了接种量难以控制的难 题，使实验结果科学更可信。 方法:从患者病变处取材，培养并分离出红色毛癣菌、 絮状表皮癣菌、石膏样毛癣菌、犬小抱子菌各一株，将菌株 分离纯化、重新鉴定后接种在沙氏固体培养基土，27C培养 10天，取出数块菌丝用无菌研磨器均匀研磨使菌丝断裂，相 当于分隔处即细胞大小，以肉眼无明显颗粒为度。用血细胞 计数板计数，包括抱子和菌丝 (以分隔处或一个抱子计为 1 个CFU)，将其浓度用RPMI-1640液体培养基稀释调至IX 中 文 摘 要 106efu/ml^-5X10`cfu/ml之间(2倍终浓度)。将山苍子油用 RPMI-1640液体培养基倍比稀释使其浓度为80000ug/ml一 156ug/ml。将氟康哇用RPMI-1640培养基倍比稀释使其浓度 为128ug/ml-0.25ug/ml。用96孔(12X8)酶标板进行实`n 取l00ul药液依次加入%孔酶标板的1.10列中，各浓度药 液依次加入，配制过程中每一浓度梯度完成后应更换吸头。 第1I列为生长对照，加入 100ulRPMI-1640液体培养基，不 含有抗真菌药物。取200ulRPMI-1640液体培养基加入第 12 列作阴性对照。将菌悬液加入96孔酶标板的1-11列中， 每孔 100u1o保湿，不动摇，27C温箱孵育，4人 (96小时) 观察结果。为了确定药物的抗真菌作用是抑菌还是杀菌作 用，从判定为MIC值的含有山苍子油的孔中取培养液转种到 沙氏培养基中27C培养21天，如果仍无真菌生长为杀菌作 用，若重新有真菌生氏为抑菌作用。应用MIC浓度的山苍子 油作用于石膏样毛癣菌，24小时后取标木;另取正常石膏样 毛癣菌作对照。将标本用戊二醛预固定，送电镜室。霜剂的 制作:以单纯霜为基质，取1000g，加入山苍子油35m1,搅 拌2小时，装盒。病例选择:共26例浅部真菌病患者，其 中24例手足癣患者，2例体癣患者。手足癣患者中10例为 红斑鳞屑型，7例为水疤型，3例为浸渍糜烂型。年龄范围 18^-40岁，男女比例 3:1。所有病例均有典型皮损，真菌 镜检阳性。方法:外用3%的山苍子油霜剂，每日2次，14 人后复查，记录自觉症状、皮损变化、真菌镜检结果及有无 不良反应等情况。疗效判定:痊愈症状消失，皮损消退， 真菌镜检阴性;好转 症状消失，皮损部分消退，鳞屑减少 或水疮干枯，真菌镜检阴性;无效 症状持续，皮损未见好 2 中 文 摘 要 转，真菌镜检阳性。 结果 1、体外药敏实验:山苍子油对四种皮肤癣菌的 MIC值均为312.5ug/ml-156.25ug/ml。所有转种的培养液均 未见有真菌生一长，证明山苍子汕的抗真菌作川呈杀菌作川。 电镜结果:扫描电镜 经山苍子油作川 24小时后的菌丝十 枯，表面变形，表面凹陷、萎缩、皱瘪，有的菌丝断裂。透 射电镜 经山苍子油作用24小时后细胞变形，呈不规则形; 细胞壁粗糙，疏松变厚，厚薄不均:细胞浆结构模糊，线粒 体肿胀;细胞核凝固、破碎。2,临床实验结果:含3%的山 苍子油霜剂治疗浅部真菌病26例，痊愈22例，好转3例， 无效1例，总有效率%%。 结论:1、山苍子油为广谱高效杀真菌剂，而且对皮肤 癣菌有较强的杀灭作用。2, 3%的山苍子油