慢病毒介导pesephin基因修饰的骨髓间充质干细胞移 植治疗大鼠帕金森模型的作用.pdf

慢病毒介导Persephin 基因修饰的骨髓间充质干细胞移植 治疗大鼠帕金森模型的作用 摘要 Persephin (PSPN)是胶质细胞源性神经营养因子中的一员， 它能够促进神经组织的存活与分化。 目的：本实验的目的是评价 PSPN 基因修饰的骨髓间充质干 细胞 Lv-PSPN-MSCs 对 6-OHDA 损伤所致帕金森大鼠模型的潜 在治疗作用 方法：本实验首先在体外分离骨髓间充质干细胞，然后对其 进行扩增及鉴定。免疫荧光方法检测 MSCs 表面神经蛋白 nestin, GFAP and S100 等的表达，慢病毒转染 MSCs ，流式细胞仪检测 Persephin 对 MES23.5 的作用，帕金森模型建立及纹状体细胞注 射，脑片免疫荧光检测 Nestin , GFAP, MAP-2 and connexin 43 的 表达情况，腹腔注射阿扑吗啡观察大鼠旋转行为的改变，高效液 相检测不同组中多巴胺的含量。 结果：利用贴壁法得到纯度较高的骨髓间充质干细胞，细胞 表面抗原检测显示大部分细胞 CD44 和 CD90 阳性，CD34 和 CD45 阴性，进一步的实验显示 rMSCs 免疫荧光染色 GFAP （80±2.6% ）、Nestin (10.8±5.9%) 、β3-tubulin (89.2±4.5) 、NES （65±2.2% ）、S100 （77.2±4.2% ）、IBA-1 （80.7±6.4% ）阳性。 WB 和 PCR 显示慢病毒成功转染 MSCs ，采用流式细胞仪显示 Persephin 对 MES23.5 有一定的保护作用。细胞移植入后，在纹 万方数据 状体内迁移、分化，部分细胞表达 Nestin, GFAP, MAP-2 和 connexin 43 ，Lv-PSPN-MSCs 组表达量较其他组明显增强。不同 组细胞移植后，阿扑吗啡诱导的旋转行为显示 Lv-PSPN-MSCs 组明显降低。高效液相检测纹状体内多巴胺的含量， Lv-PSPN-MSCs 组较其他组明显增多。 结论：我们的研究结果表明在纹状体移植慢病毒介导的骨髓 间充质干细胞对大鼠帕金森病有显著的治疗作用。 关键词：骨髓间充质干细胞；PSPN 基因；帕金森病；转导；慢病毒 万方数据 The effect of lentivirus-mediated PSPN genetic engineering bone marrow mesenchymal stem cells on Parkinson’s disease rat model Abstract Persephin (PSPN) is one of neurotrophic factors of the glial cell line-derived neurotrophic factor (GDNF) family ligands (GFLs) which have been found to promote the survival of specific populations of neurons. Object ：The aim of this study was to assess the potential therapeutic function of g