辛伐他汀对人牙细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响.pdf

目 录 中文摘要……………………………………………………………………·1 英文摘要……………………………………………………………………4 研究论文辛伐他汀对人牙髓细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响 前言……………………………………………………………………………………·8一刖百……………………………………………………………………………………… 材料与方法……………………………………………………………·8 结果……………………………………………………………………………………··12 附图…………………………………………………………………14 附表……………………………………………………………………………17 讨论……………………………………………………………………………………··19 结论……………………………………………………………………………………一23 参考文献……………………………………………………………23 综述辛伐他汀的作用机制和临床应用……………………………26 致谢…………………………………………………………………………………………·32 个人简历…………………………………………………………………33 中文摘要 辛伐他汀对人牙髓细胞增殖及碱性磷酸奠活性的影响 摘 要 目的：本试验采用体外细胞培养的方法，探讨辛伐他汀对体外培养人 dental 牙髓细胞(humanpulp 碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。 方法：选择年龄为18．28岁新鲜拔除的健康、完整、无龋、无隐裂的 恒牙或第三磨牙(河北医科大学第二医院口腔外科提供)。采用组织块酶 解法培养细胞。待细胞长出后在倒置显微镜下观察细胞形态及生长情况。 细胞传代成功后，取第4代对数生长期人牙髓细胞进行细胞爬片，用SABC 法进行波形丝蛋白和角蛋白免疫组织化学染色，鉴定细胞来源。 MTT比色法检测辛伐他汀对人牙髓细胞增殖能力的影响：1)选用第 4代生长良好的牙髓细胞，制备lxl04+／ml的细胞悬液，接种于96孔板， 3)实验分为对照组、空白对照组和实验组，每组设5个孔。对照组：在 养液)。空白对照组：在无细胞的孔内加入150“1的完全培养液。实验组： 在有细胞的孔内分别加入150p,1用完全培养液配制的终末浓度分别为lO。 养至第ld、5d时，弃孔中培养液，以PBS冲洗，在所需检测的培养孔 4h，终止培养，吸弃孔内上清液，在每孔分别加入1001xL二甲基亚砜 nlil波长， (DMSO)，室温下轻微振荡5min。以空白对照孔调零，选择492 在酶标仪上检测各孔吸光度值(A)。 检测辛伐他汀对人牙髓细胞碱性磷酸酶(ALP)活性的影响：1)选 用第4代生长良好的牙髓细胞，制备1x104个／mL的细胞悬液，接种于96 孔板，每孔1001A。2)等细胞长满孔底后，弃去孔中的培养液，用PBS 浸洗细胞。3)实验分为对照组、空白对照组和实验组，每组设5个孔。 对照组：在有细胞的孔内加入150pl完全培养液(含2％胎牛血清的高糖 中文摘要 实验组：在有细胞的孔内分别加入150lxl用完全培养液配制的终末浓度分 分别继续培养至第1d、5d时，弃孔中培养液，用PBS冲洗，每孔加入 50止(19／L)的TritonX一100，4。C过夜，在镜下观察细胞完全裂解后， min，以O．5 每孔分别加入ALP底物混合液100btL，培养箱内37C孵育30 下每孔的吸光度A值。 细胞周期的测定：1)选用第4代生长良好的牙髓细胞，制备5x104 组加四甲基偶氮唑盐实验中促进细胞增殖率最佳的10。7mol／L辛伐他汀培 养2d后弃液，用胰蛋白酶消化，分别收集到各自的离心管内，加入70％ 冰乙醇固定，4C冰箱保存。4)细胞周期检测时，吸取1001xL的细胞悬液，