全氟辛烷磺酸对鼠肝脏脂褐质含量及P16基因表达的影响.pdfVIP

·中文论著摘要· 全氟辛烷磺酸对大鼠肝脏脂褐质含量及P16基因表达 的影响 目 的 全氟辛烷磺酸(PFOS)是末端带有磺酰基官能团的全氟烃类化合物。碳氟键键 能高使PFOS具有很高的热、化学稳定性，同时PFOS还具有疏水疏油的性质， 因此被广泛应用于民用和工业生产领域。但研究表明，PFOS具有持久性有机污染 物的特点，即难降解性，生物蓄积性和远距离迁移的特性。环境调查资料表明， 目前全球范围内各类水体、土壤、大气等环境介质和生物体内都已检出PFOS污 染，并且生物体内的PFOS可通过食物链进行生物放大和累积，使得处于食物链 中高营养级的生物体内具有高浓度的PFOS富积。人群调查资料显示，全球范围 内各国家人体血液中均检测出PFOS污染。PFOS易于被机体吸收，主要分布在血 清和肝脏。毒理学研究表明，PFOS可增高海马神经元细胞[Ca2+]i，降低血清甲 状腺激素水平，损害精子形成和成熟过程。因此PFOS的安全问题已引起各国政 府部门、环境学家和毒理学家的广泛关注。有文献报道PFOS可增加细胞内活性 氧(ROS)浓度，破坏抗氧化防御系统。ROS是导致衰老的主要因素之一，因此本 实验拟通过测定PFOS的靶器官．肝脏中氧化损伤相关指标、脂褐质(LF)含量和P16 基因表达，来初步探讨PFOS是否具有促进衰老的作用。 材料与方法 一、PFoS水溶液配制 组1．7mg／L，配制PFOS浓度为各染毒剂量20倍的储备液，临用时稀释到染毒剂 且 里。 二、动物分组和染毒 动物按体重随机分为4组，对照组和低、中、高剂量组，每组6只。采用饮 水染毒，连续染毒90天，染毒期间自由进食。 三、动物处理方式 染毒结束后，乙醚麻醉大鼠，心脏采血，处死，常规分离血清。分离肝脏， 在生理盐水中漂洗，用滤纸吸干，立即称重，计算肝脏脏器系数。 四、观察指标与检测方法 1、体重监测 染毒后每隔7天测一次体重 2、肝脏脏器系数的测定 100％ 肝脏脏器系数=肝脏重量(g)／体重(g)x 3、血清PFOS含量测定 固相萃取液相色谱质谱联机法(LC．MS法)测定 4、组织蛋白含量检测 双缩脲法用分光光度计测定 5、丙二醛(MDA)含量检测 硫代巴比妥酸法用分光光度计测定 6、总抗氧化能力(T-AOC)检测 应用组织中抗氧化物质能使Fe3+还原成Fe2+，Fe2+可与菲啉类物质形成稳固 络合物的原理用分光光度计测定 7、LF含量检测 有机溶剂萃取法用荧光分光光度计测定 8、P16mRNA表达测定 RT-PCR法测定 9、肝细胞周期检测 流式细胞仪法测定 五、数据处理 l 所有结果用均值4-标准差(i±s)表示，采用SPSS1．0统计软件对数据进行分 2 析，多组均数间显著性差异检验采用单因素方差分析。总体比较差异有统计学意 义时，若方差齐采用LSD法，方差不齐采用DunnettT3法进行组间两两比较，以 P0．05表示差异具有统计学意义。 实验结果 一、大鼠血清中PFOS浓度 血清PFOS浓度随染毒剂量的增加而增加，并呈现显著的正相关关系(严0．996， PO．05)。 二、体重变化趋势和肝脏脏器系数 染毒期间，各实验组大鼠体重逐渐增加，各染毒组大鼠体重与对照值相比， 差异无统计学意义(Pl0．05)。染毒90天后，肝脏重量和肝脏脏器系数随染毒剂量 的增加而增加，5．0和15．0mg／L染毒组肝脏重量和肝脏脏器系数均显著高于对照 值(尸lO．05)。 三、MDA、LF含量和T-AOC 著增高(P0．05)；15．0mg／L染毒组大鼠肝脏中LF含量显著高于对照组(P0．05)， 而其它染毒组与对照组比较差异无统计学意义(尸O．05)。 四、肝脏P16基因mRNA表达 与对照值相比，差异无统计学意义(尸0．05)。 五、肝脏细胞周期 各染毒