动物源沙门氏菌药基因及毒力岛基因mgtC和sopB的检测.pdfVIP

摘 要 沙门氏菌（Salmonella）是一种重要的致病菌，它能引起人以及动物疾病。通过 流行病学调查报告表明，沙门氏菌含有的毒力岛基因与沙门氏菌病有非常紧密的联 系。毒力岛相关基因的发现，对疾病的控制和预防，理解细菌性疾病的发生和发展具 有很深远的意义。 本课题是利用 PCR （Polymerase Chain Reation）技术，按照致病性动物源性沙门 氏菌的耐药基因和毒力岛特异性基因来设计引物， 通过优化扩增条件和引物组合的配 对，得到了致病性畜禽沙门氏菌耐药基因 PCR 检测方法以及毒力岛基因双重 PCR方 法。运用建立的方法对猪源沙门氏菌进行了流行病学调查，旨在为人畜共患沙门氏菌 病的控制和预防提供了充分的理论基础。 具体的研究方法及研究的结果如下：  1、动物源性沙门氏菌四种耐药基因的 PCR 检测 该研究对实验室已经分离保存到的 24 株畜禽沙门氏菌株（鸡源 10 株、猪源 14  株）进行了药敏试验，并设计 6对引物，对氨基糖苷类、四环素类、β­内酰胺类和氯 霉素类四大类药物的耐药基因进行了扩增，建立了耐药基因的 PCR 检测方法，最后 对畜禽沙门氏菌的耐药基因和耐药性进行了对比，药敏试验结果表明：20  株试验菌 株对 2  种以上抗菌药物耐药，多重耐药率为 83.3%，其中 2  耐 5 株（25%），4  耐 7  株（35%），5 耐 5 株（25%），7  耐 2 株（10%），8 耐 1 株（5%）。耐药基因 PCR  检测表明：tetA  和  tetB基因的扩增率对四环素类药敏实验相一致。blaTEM 基因的扩 增率对氨苄西林和头孢氨苄的药敏实验相一致。 对氨基糖苷类耐药的菌株中 aac(3)­Ⅰ 和 aph(3)­Ⅱ 扩增率与菌株对庆大霉素、链霉素和新霉素的药敏实验相一致。 但是氯 霉素类耐药菌株中耐药基因  catI  检出率与菌株对氟苯尼考的和氯霉素的耐药性结果 相关性不显著。  2、动物源性沙门氏菌毒力岛基因 mgtC 和 sopB 的 PCR 的检测 实验以沙门氏菌毒力岛基因为研究对象，根据 GenBank 发表的沙门氏菌毒力岛 基因序列，分别设计合成了沙门氏菌毒力岛 mgtC 和 sopB 的两对引物。以沙门氏菌  (ATCC9150)菌株的核酸为模板，经过引物特异性试验，DNA模板灵敏度试验，优化 反应条件，成功的建立了快速鉴别以及检测沙门氏菌的双重 PCR 方法。特异性试验 结果表明，引物mgtC和 sopB 建立的双重 PCR 仅能扩增出沙门氏菌(ATCC9150)的两 段特异性片段，大小分别是 500bp 和 1000bp。敏感性试验结果表明，检测到的最低 浓度是 10 CFU/mL。 I  此方法能够对含有毒力基因的畜禽沙门氏菌进行检验， 也能够对致病性沙门氏菌 进行快速的检测。  3、沙门氏菌毒力岛双重 PCR检测方法的应用 本研究挑取临床分离的 9猪源沙门氏菌， 然后对其进行检验用已经建立好的毒力 岛双重 PCR 方法。研究说明：在 9 株猪源性沙门氏菌分离株中，有 8 株菌株被检测 出mgtC基因，此方法的检测率为 88.9%，同样也有8株被检测出了 sopB基因，检出 率为 88.9%。通过检测结果显示：本研究所建立起来的双重 PCR检测方法灵敏度高、 特异性强，该方法对沙门氏菌的快速诊断和对分子流行病学调查提供了有效的保障。 上述结果表明，本研究成功建立了沙门氏菌耐药基因 PCR 检测方法和毒力岛双 重 PCR检测方法，同时对畜禽沙门氏菌的耐药基因和耐药性进行了对比，结果显示， 畜禽沙门氏菌分离株中耐药基因的检出率与药敏实验的结果基本一致。 另外建立的快 速鉴别以及检测沙门氏菌毒力岛的双重 PCR 方法具有非常低的检测浓度和非常高的 特异性，能对沙门氏菌进行快速的检测，同时可对人畜共患沙门氏菌病的预防和控制 提供了理论指导。 关键词：沙门氏菌，耐药基因，毒力岛，mgtC基因，sopB基因，PCR II  Abstract  Salmonella is an important pathogen that c