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人有了知识,就会具备各种分析能力, 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书,广泛阅读, 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍,我们能丰富知识, 培养逻辑思维能力; 通过阅读文学作品,我们能提高文学鉴赏水平, 培养文学情趣; 通过阅读报刊,我们能增长见识,扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操, 给我们巨大的精神力量, 鼓舞我们前进。 * * 人工构建的质粒 1.人工构建质粒的目的: 人工构建的质粒主要用于基因工程技术,在该技术中质粒主要被用作载体。 基因工程的程序: (1)获取所需要的基因 (2)将目的基因与载体连接 (3)将重组DNA导入到受体细胞,外源基因得到表达。 2.基因工程载体必须具备下列条件: 1)环状DNA结构 2)具有限制性内切酶的位点,以便与外源基因连接 3)可不依赖于染色体进行独立复制 4)具有有别于宿主的选择性标记 5)可通过特定方法导入某些宿主细胞 功能不同 特殊用途的载体 克隆载体 表达载体 拷贝数高 具有单(多)克隆位点 载体本身带有一个或多个选择标记 除具有克隆载体的一般特性以外,还具有一套表达元件: 启动子、SD序列、终止子 3.基因工程载体分类 4、质粒作为载体 A A T T C T T A A G G A A T T C T T A A EcoRI 酶切 转化 1、高温变性 2、低温复性 3、一定温度延伸 PCR 三、转座因子 存在于细菌染色体上,可作为独立单位在染色体上自由移动的DNA片断。转座因子有三种类型:插入序列(IS)、转座子(Tn)、及特殊噬菌体。 1.插入序列(insertion sequence,IS) 是最小的转位因子,长度不超过2kb,不携带任何已知与插入功能无关的基因区域,往往是插入后与插入点附近的序列共同起作用,可能是原细胞正常代谢的调节开关之一。 Transposase ABCDEFG GFEDCBA IS IS 2.转座子(transposon,Tn) 长度一般超过2kb,除携带与转位有关的基因外,还携带耐药性基因、抗金属基因、毒素基因及其他结构基因等。因此当Tn插入某一基因时,一方面可引起插入基因失活产生基因突变,另一方面可因带入耐药性基因而使细菌获得耐药性。转座子可能与细菌的多重耐药性有关。 IS IS Resistance Gene(s) IS IS Resistance Gene(s) 转座子的特征 转座子 携带耐药或毒素基因 Tn1 Tn2 Tn3 AP(氨苄青霉素) Tn4 AP、SM(链霉素)、Su(磺胺) Tn5 Km(卡那霉素) Tn6 Km Tn7 TMP(甲氧苄氨嘧啶)、SM Tn9 Cm(氯霉素) Tn10 Tc(四环素) tn551 Em(红霉素) Tn971 Em Tn1681 大肠埃希菌(肠毒素基因) 3.转座噬菌体或前噬菌体 是一些具有转座功能的溶原性噬菌体,当整合到细菌染色体上,能改变溶原性细菌的某些生物学性状,如白喉棒状杆菌、肉毒梭菌等的外毒素就是由转座噬菌体的有关基因所编码的。另外,转座噬菌体从细菌染色体分离脱落时,可能连带有细菌的DNA片段,故它还可能在遗传物质转移过程中起载体作用。 四、毒力岛(PAI) 位于细菌染色体之内,分子结构与功能有别于细菌染色体的病原菌的某个或某些独立基因群。 第二节 基因突变 一、细菌变异类型 1.形态变异 (1)自然形成或诱导产生的细菌L型。 (2)病原菌在特定的动物组织器官中,可发生形态结构变异 2.结构和抗原性变异。 (1)荚膜变异。(2)芽孢变异。(3)鞭毛变异。 H-O变异:有鞭毛能运动的细菌丧失鞭毛形成能力的变异称 3.培养性状的变异 S-R变异;R-S 变异 4.毒力变异 5.生化形状变异 (1)营养缺陷型变异(2)诱导酶产生。(3)终末产物阻遏。6.耐药性变异 形态结构变异 3-6%食盐鼠疫杆菌────→多形态性(衰残型)。???????? 琼脂培养基 形态结构变异 青霉素、溶菌酶正常形态细菌──────→ L型变异 抗体或补体 (部分或完全失去胞壁) 正常霍乱弧菌 霍乱弧菌L型 毒力变异 β棒状噬菌体白喉棒状杆菌────→ 获得白喉毒素 二、细菌
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