酶的种类,活性及影响因素分析报告.pptVIP

【摘要】：酶广泛存在与生物体中，对生命的生化反应至关重要，本实验主要探究不同浓度下催化活性的不同，以及温度，pH值，抑制剂对于酶活性的影响。 【关键词】：酪氨酸酶，唾液淀粉酶，活性，pH，温度，抑制剂 【酶的特性综述】 酶是一种具有生物活性的蛋白质，有单纯酶和结合酶两种。单纯酶只含蛋白质，不含其它物质，其催化活性仅由蛋白质的结构决定。结合酶则由单纯蛋白质和辅基组成，辅基是结合酶催化活性中不可缺少的部分。 (1)酶的催化效力远远超过化学催化剂(高108～109倍)。 (2)酶催化剂具有高效化学选择性，能从混合物中选择特定异构体进行催化反应。 (3)酶催化剂对反应条件要求苛刻，如pH值、温度都各有特定的界限，超出界限即可引起酶蛋白的变性与分解。 酪氨酸酶是一种多酚氧化酶,具有广泛用途。它主要存在于动植物体中,在它的催化作用下经过一系列的生化反应生成色素。缺乏此酶将导致代谢性病变：白化病；相反，如果该酶活力过高，又可形成黑色素瘤，最近人们还研究发现酪氨酸酶可能还与白癜风发病机制有关。因此研究酪氨酸酶不仅有理论意义，而且还有一定的应用价值。 酪氨酸是一种以Cu+ 或Cu2+ 为辅助因子的全酶，能催化空气中的氧对多巴的氧化反应，催化过程可以通过多巴转换反应的颜色变化来监测，通过测定吸光度随时间的变化来求的酶的活性。 25℃时在 1min内转化1 mol底物所需要的量为酶的活性单位。通过下式可计算出所用的酶的活性： a=ΔA*10^-6/ktV 式中：a为所用溶液的酶的活性，ΔA为最大吸收处吸光度的变化，t为时间，k为酪氨酸的摩尔吸收系数，V为加入的酶体积。 进而计算出所用原料中的酶的活性： A=a×V0/m 式中：a为原料中酶的活性，V0为原料所得的酶溶液的总体积（9ml），m为原料总质量（10.0g） 酪氨酸酶的提取 在研钵中放入10.0g切碎的马铃薯,加入7.5mlpH值7.2的缓冲溶液,研磨挤压。滤出提取液,离心分离。倾出上层清液保存于冰浴或冰箱中。 酶活性的测定 取2.5ml上述提取液,用pH值7.2的缓冲溶液于10.0ml比色管中稀释至刻度,摇匀。取0.1ml稀释过的提取液于10.0ml比色管中,加入2.9mlpH值6.0的缓冲溶液,再加入2.0ml多巴溶液,用分光光 度计在480nm处测定吸光度。开始6min内每分钟读1个数,以后隔2min读1个数,直至吸光度变化不大为止,得吸光度为A1。取0.2,0.3,0.4ml已稀释过的提取液重复上述试验,得吸光度分别为A2、A3、A4。 表1：不同酶加入量不同时间反应的吸光度测定 提取液/mL 不同反应时间/(min)吸光度测定值 1 2 3 4 5 6 8 10 12 0.10 0.081 0.093 0.100 0.113 0.127 0.140 0.137 0.138 0.141 0.20 0.139 0.152 0.167 0.183 0.198 0.221 0.226 0.230 0.230 0.30 0.187 0.201 0.223 0.240 0.256 0.271 0.281 0.283 0.290 0.40 0.015 0.019 0.026 0.033 0.037 0.045 0.044 0.051 0.058 以吸光度值为纵坐标，时间为横坐标，可得出在加入酶的作用下多巴的转换动力学过程，再由直线部分得出转换速率，即为酶的活性。为使作图更为准确，现只取前六分钟内数据作图如下： 图1:0.10mol提取液关系曲线 图2:0.20mol提取液关系曲线 图3:0.30mol提取液关系曲线 图4:0.40mol提取液关系曲线 根据实验数据所画图及求出的活度来看，分别加入0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml的活性是不一样，按照实验推测，应该是逐渐上升的，但是从实验结果反应的情况上来看，并不是如此，而是上升之后下降，原因在于酶提取液提取之后保存方法不得当，并没有冰浴，所以导致酶失活，从而导致活性下降的情况 依次得出不同提取液的活性，比较不同体积的提取液加入后相同量的多巴转换速率。由于放置时间较长，第四组实验已经失去可靠性。（酪氨酸酶的吸光系数为lg k=3.7。） 表2：酶的活性计算 已稀释的提取液体积/mL 活性 /A·min-1 原提取液活性 /（mL-1） 原料活性 / g-1 0.l0 0.011 21.94 17.55 0.20 0.016 15.96 12.77 0.30 0.017 11.31 9.048 0.40 0.006 2.993 2.394 取0.40ml稀释过了的提取液在沸水浴中加热5min，冷却后配