原核基因表达调控技术方案.ppt

7 原核基因表达调控模式 7.1 原核基因表达调控总论  细菌的染色体由环状的单分子DNA组成，约有95%的DNA为编码序列，只有约5%为基因间的DNA。有一部分基因间的DNA是有重要功能的，如复制原点(origin of replication)，另一些基因间区域可能涉及到和DNA包装蛋白的相互作用。根据基因表达产物的区别，可把基因分为两类：调节型基因（regulated genes）的表达受细胞生长的环境影响，在不同的生长时期有不同的表达活性。组成型基因（constitutive genes）也叫管家基因(housekeeping genes)，其特点是不论环境条件如何，这些基因呈现持续表达，其基因产物维持了细胞生长和分裂的正常功能。由于在生长的细胞中这些基因总是处于活性状态，因此这些基因也叫做组成型基因。不论是调节型基因还是管家基因，表达都受到调控，只是调控方式不同。 基因表达调控主要表现在以下几个方面： 1 转录水平上的调控 2 转录后水平的调控，包括 （1） mRNA加工成熟水平上的调控（2）翻译水平上的调控 原核生物中，营养状况和环境因素对基因表达起着举足轻重的影响。在真核生物尤其是高等真核生物中，激素水平和发育阶段是基因表达调控的最主要手段，营养和环境因素的影响力大为下降。 7.1.1 原核基因调控分类 原核基因调控主要发生在转录水平上，根据调控机制不同可分为： 负转录调控 正转录调控 σ因子对原核生物转录起始的调控 在所有的调控方式中，基因表达关闭的越早，就越不会将能量浪费在合成不必要的mRNA和蛋白质上。因此，其表达开关的调控关键机制主要发生在转录的起始。 原核生物细胞仅有一种RNA聚合酶，核心酶参与转录延长，全酶控制转录起始。在转录起始阶段，σ因子识别特异启动序列。不同的σ因子决定特异编码基因的转录激活，也决定不同RNA（mRNA、rRNA和tRNA）基因的转录。 离体实验表明，若仅用核心酶进行转录，则对模板链和起始点的选择都有很大的随意性，而且往往同一段DNA的两条链都被转录。可见，哪条DNA链被转录，转录方向与转录起点的选择都与σ亚基有关。σ亚基参与启动子的识别、结合以及转录起始复合物的异构化，σ因子的取代在细胞发育和对环境的应答反应中起主导作用。 在E.coli中，主要的σ因子为σ70可与核心酶一同被纯化。但另外一些σ因子能够识别与主要启动子顺序不同的另类启动子，并促使核心酶起始转录。这些变异的σ因子通常能急剧改变细胞RNA的合成方式，使一组全新的基因得以表达。例如，热激反应是生物体对高温作出的保护性反应，其重要的反应是启动热休克蛋白HSP的表达。基因htpR（heat shock regulatory gene）是E.coli转到热休克反应所必需的。htpR的产物是一个32KD的变异的σ因子，称为σ32，σ32很不稳定，能引导核心酶在热休克基因的启动子处起始转录。 E. coli的σ60是在氮饥饿时起作用的，正常时E. coli细胞中仅有少量σ60，但当介质中氨缺乏时，σ60即大量增多，以开启某些可利用其它氮源的基因，即σ60能引导核心酶识别具有特殊共同序列的另类启动子。 从一组基因表达变换为另一组基因表达往往需要更换σ因子，这在噬菌体生命周期的裂解期和溶源期的转换中表现最为明显。枯草杆菌的正常σ因子(相当于E. coli中的σ70)为σ43，它能识别σ70所识别的共同顺序。在噬菌体SP01感染B. subtilis（枯草杆菌）时即会出现新的σ因子。SP01的感染周期一般可分为三期：感染初期，早期基因被转录；4～5分钟后早期基因转录停止，中期基因开始转录；8～12分钟后中期基因的转录又被晚期基因所取代。早期基因由宿主菌的全酶转录，故仍用σ43，而中期及晚期基因转录则需要新的σ28和σ34因子来取代原来的σ43。 7.2 乳糖操纵子与负控诱导系统 原核生物绝大多数基因按功能相关性成簇地串联、密集于染色体上，共同组成一个转录单位即操纵子（operon），如乳糖（lac）操纵子、阿拉伯糖（ara）操纵子及色氨酸（trp）操纵子等。一个操纵子只含一个启动序列及数个可转录的编码基因(通常为2～6个，有的多达20个以上)，在同一启动序列控制下，操纵子可转录出多顺反子mRNA。操纵子在原核基因组中普遍存在，原核基因的协调表达就是通过调控单个启动基因的活性完成的。 法国科学家Francois Jacob和Jacques Monod于1962年最早发现了乳糖操纵子，人们随后发现其它原核生物的基因调控也使用类似的方式，这就是操纵子的调控模型。他们的学说使我们能够从分子生物学水平认识基因表达的调控，