第三章 细胞生物学研究方法
名词解释:原位杂交、单克隆抗体、细胞株、流式细胞术、原代培养、传代培养、 细胞融合、细胞拆合、分辨率,细胞系.
名词解释:
1.原位杂交
在不破坏细胞或细胞器的情况下,用核酸探针检测特定核苷酸序列在染色体上的精确位置的技术。染色体在高pH值条件下,DNA解链,带标记的核酸探针即刻与染色体一定部位杂交。既可检测DNA序列,也可检测RNA序列。
2.单克隆抗体
来自单个细胞克隆所分泌的抗体分子。通过克隆单个分泌抗体的B淋巴细胞,获得的只针对某一抗原决定簇的抗体,具有专一性强、能大规模生产的特点。
3.细胞株
通过选择从原代培养物或者细胞系中获得的具有特殊性质或者标志的细胞。
细胞株:在体外一般可以顺利地传40—50代,并且仍能保持原来二倍体数量及接触抑制行为的传代细胞。
4.原代培养
直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。因此,较为严格地说是指成功传代之前的培养,此时的细胞保持原有细胞的基本性质。
原代细胞培养:直接从有机体取出组织,通过组织块长出单层细胞,或者用酶消化或机械方法将组织分散成单个细胞,在体外进行培养,在首次传代前的培养称为原代培养。
5.传代培养
将培养细胞从培养器中取出,把一部分移至新的培养器中再进行培养,这种培养方式称为传代培养,亦称为继代培养或连续培养。
传代细胞培养:原代培养形成的单层培养细胞汇合以后,需要进行分离培养(即将细胞从一个培养器皿中以一定的比率移植至另一些培养器皿中的培养),否则细胞会因生存空间不足或由于细胞密度过大引起营养枯竭,将影响细胞的生长,这一分离培养称为传代细胞培养。
6.细胞融合
真核细胞通过介导和培养,两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程称为细胞融合(cell fusion)或细胞杂交(cell hybridization)。
细胞融合:两个或多个细胞融合成一个双核细胞或多核细胞的现象。一般通过灭活的病毒或化学物质介导,也可通过电刺激融合。
细胞融合 cell fussion 两个细胞通过质膜的接触并相互融合形成一个细胞的过程。融合后的细胞只有一个连续的细胞质膜。
7细胞拆合
把细胞核与细胞质分离开,再把不同来源的胞质体和核体相互组合,形成核质杂交细胞。
物理方法:机械或短波光去核,微吸管移核化学方法:细胞松弛素B促细胞排核
8分辨率
能将物体相近两点分辨清楚的距离极限(显微镜最重要的性能参数)
D= 0.61( / N.A.
(代表光波波长;N.A.为镜口率,也称数值孔径。
N. A. =n ( Sin (( /2) n:物镜与标本间介质的折射率;(1或1.515)
(:镜口角(聚光焦点对物镜镜 口的张角,180o)
结论: 通过公式可知光学显微镜最大分辨率0.2um 减小分辨率需减小(
分辨率:区分开两个质点间的最小距离。
9.细胞系:
原代培养经首次传代成功后即为细胞系。
细胞系 cell line 来源于动物或植物细胞,能够在体外培养过程中无限增殖的细胞群体。
细胞系:在体外培养的条件下,有的细胞发生了遗传突变,而且带有癌细胞特点,失去接触抑制,有可能无限制地传下去的传代细胞。
10.流式细胞术
流式细胞术是对单个细胞进行快速定量分析与分选的一门技术,使用仪器为流式细胞仪。
主要应用:
用于定量测定细胞中的DNA、RNA或某一特异蛋白的含量;测定细胞群体中不同时相细胞的数量;从细胞群体中分离某些特异染色的细胞。
第四章 细胞质膜
名词解释:生物膜 单位膜 流动镶嵌模型 脂质体
1.生物膜
质膜、细胞内膜、线粒体、叶绿体的膜等统称为生物膜
细胞内的膜系统与细胞质膜统称为生物膜。(细胞质膜曾称细胞膜,是指围绕在细胞最外层,由脂质、蛋白质、糖类组成的生物膜。)
2.单位膜
JD. Robertson 1957用超薄切片技术电镜观察,提出单位膜模型,所有的生物膜都是由蛋白质—脂质—蛋白质的单位膜构成。暗-明-暗三条带。厚约7.5nm。
3.流动镶嵌模型
Singer 和Nicolson 1972 根据免疫荧光、冰冻蚀刻的研究结果,提出了“流动镶嵌模型”
脂类分子构成膜的基质;
蛋白有两种,插入膜中(整合蛋白),或附着于细胞表面(周边蛋白),表现出分布的不对称性;
膜是流动的,膜分子在膜平面内可行各种运动
4.脂质体
脂质体是根据磷脂分子可在水相中形成稳定的脂双层膜的趋势而制备的人工膜(artificial membrane)。
单层脂分子铺展在水面上时,其极性端插入水相而非极性尾部面向空气界面,搅动后形成乳浊液,即形成极性端向外而非极性端在内部的脂分子团或形成双层脂分子的球形脂质体。
第五章 物质的跨膜运输
名词解释:主动运输 通道蛋白 载体蛋白 膜泡运输 笼形蛋白 跨细胞运
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