第八章核移植技术与动物克隆解说.ppt

动物克隆(clone)： 细胞核移植技术： 利用显微操作技术将一个细胞的细胞核移植到另一个去核卵母细胞中，经人工活化和体外培养后，再移植入代孕母体内，使其发育为含有与供体细胞相同遗传物质的个体。 思考题 1、简述多利羊的培育流程并讨论多利羊产生的学术意义。 2、简述细胞核移植的类型及其主要操作技术。 第八章核移植技术与动物克隆 教学目的和要求：2学时 掌握克隆的定义； 掌握细胞核移植技术的类型； 掌握细胞核移植技术的一般流程； 了解细胞核移植技术的应用。 一、什么是动物克隆？ 动物克隆是一种通过核移植过程进行无性繁殖的 技术。发育早期的动物胚胎细胞，或成年动物的体 细胞，经显微手术移植到去掉细胞核的卵母细胞中 之后，在适当的条件下，可以重新发育成正常胚 胎。这种胚胎被移植到生殖周期相近的母体之中， 可以发育成为正常动物个体。经过核移植而产生的 动物，其遗传结构与细胞核供体完全相同。这种不 经过有性生殖过程，而是通过核移植生产遗传结构 与细胞核供体相同动物个体的技术，就叫做动物克 隆。 核移植技术：所谓核移植技术就是利用显微操作技术将一个细胞的细胞核移植到另一个细胞中，或者将两个细胞的细胞核（或细胞质）进行交换，从而可能创造无性杂交生物新品种的一项技术。 胚 胎 克 隆：使用的核供体细胞如果来自多细胞阶段 的胚胎，叫做胚胎克隆。 体细胞克隆：使用的核供体细胞来自动物体，叫做 体细胞克隆。 二、两栖类细胞核移植 1938年Spemann最先提出将多细胞胚胎的每一个细胞核移植到去掉核的卵母细胞中，使它们重新发育成胚胎的设想。 1952年，Briggs和King沿用Spemann的思路和实验技术，首次获得两栖动物美洲豹蛙胚胎细胞核移植的后代． 核供体为囊胚期的胚胎细胞——实验成功 核供体为原肠胚期的中胚层和内胚层细胞——实验失败 1958年到1962年，英国剑桥大学的John Gurdon和Machineer利用爪 蟾原肠内胚层细胞核移植，培育出可育的非洲爪蟾． 1970年John Gurdon以同样的方法，用青蛙脚蹼角质化细胞进行移核 试验，蛙卵发育成了蝌蚪。 三、鱼类的核移植 　　　从1961年开始，童第周等以金鱼和鳑鮍鱼为材料，进行鱼类不同亚科间的细胞核移植获得成功，用以研究杂交细胞核与纯种细胞核在发育功能上的差异，以及细胞质对细胞核的影响． 1979年，中国科学院武汉水生物研究所利用鲫鱼做移核试验。他们把鲫鱼囊胚期细胞经过385天59代连续传代培养后，再将此种培养细胞的细胞核移植到同种鲫鱼的未受精卵中。到1980年4月，他们成功地培育了两尾无性繁殖的幼鱼，其中一条发育正常。 1989年，童第周、牛满江又将鲫鱼胚胎细胞核移入鲤鱼去核的未受精卵中，实现了不同种间的核质杂交，成功地无性繁殖了“鲤鲫核鱼”新品种。 四、哺乳类的细胞核移植 1981年，瑞士日内瓦大学和美国杰克逊实验室合作，首次对小鼠卵进行移核试验获得成功。他们将囊胚内细胞团细胞的核移入去核的受精卵中，经培养移核卵发育至囊胚期，再将此胚胎移入同步孕鼠子宫内，最后产下两雌一雄仔鼠，并发育成了可育的个体。 五、核移植技术的一般操作程序 核移植克隆哺乳动物的技术操作过程主要包括核受体和核供体的处理和制备、核移植、重组胚的体外或体内培养、核移植胚胎移入代孕母畜（寄母）等步骤 。 1．核受体细胞的准备 去核卵母细胞常常作为核移植的受体细胞。这是因为在卵母细胞的细胞质含有某种特定的因子，可以使移植核中所含有的基因表达程序发生重新排列，使已经分化了的细胞重新回到发育过程的原点，同受精卵一样开始个体发育过程。 卵母细胞的来源有两种方式：一是用激素对雌体进行超排处理，从输卵管冲出体内成熟的MⅡ卵母细胞。二是从屠宰场收集卵巢，吸出滤泡中的卵丘—卵母细胞复合体(COCs)，在体外培养成熟后作为受体。 2．核供体细胞的准备 在核移植操作中，细胞核供体细胞首先必须是完整的二倍体，该细胞必须保持有供体动物完整的基因组； 其次，供体细胞核必须能够在受体细胞质的作用下，产生细胞分化过程的倒转，变得如同刚刚受精的合子一样，能重新完成从受精到发育成一个正常动物个体的全过程。 供体细胞主要有两大类：胚胎卵裂球和体细胞。另外，核供体细胞的来源还有胚胎干细胞和胎儿成纤维细胞。 3．细胞核移植 常用的核移植方法有两种，即胞质内注射和透明带下注射。胞质内注射是用一个外径5～8μm 的注核针吸取供体核后直接注射进