洋葱皮中黄酮含量的提取、鉴别及含量测定要点.pptVIP

Page ? * 实验课题：洋葱皮中黄酮含量的提取、鉴别及含量测定 一、实验目的 1、掌握回流萃取提取洋葱皮中黄酮类化合物的方法 2、掌握分光光度计的应用 3、掌握黄酮的提取、鉴别及含量的计算方法。 二、实验药品及仪器 1、 药品： 洋葱皮（2.0g）、(体积分数)60%乙醇溶液、50g/LNaNO2溶液、100g/LAlCl3溶液、40g/L NaOH溶液、芦丁标准溶液。 2、仪器：紫外分光光度计、10ml容量瓶6个、250ml圆底烧瓶1个、100ml量筒1个、10ml量筒1个、2ml、5ml吸量管若干、玻璃棒、比色皿、索氏提取器、洗瓶、研钵、铁架台、加热套、胶头滴管、分析天平 三、实验装置 回流萃取装置用于洋葱皮中黄酮的提取 752紫外分光光度计 测量黄酮的吸光度 四、实验原理 黄酮类化合物的分子中大多有邻二苯酚、?-或 ?-羟基酮等结构，可以与铝盐铅盐镁盐等试剂发生显色反应生成显色配合物，本实验利用黄酮类化合物与铝盐的显色反应在510nm处测定吸光度，进而确定黄酮类化合物的总量，以芦丁对照品为标准物质绘制标准曲线。 NaNO2与黄酮反应使黄酮还原，再加入Al(N03)3发生络合，最后加入NaOH溶液使黄酮类化合物开环， 生成 2’羟基查耳酮发生显色反应。 1、光吸收基本定律-朗伯-比尔定律: A=?bc ?-摩尔吸收系数、C-样品质量浓度、b-光程 2、芦丁：C27H30O16、分子量610.51 计算芦丁的质量：m=Cv(C=A/?b) 3、样品中黄酮化合物制得率 E=[m/(1×1000)]×100% 五、实验步骤 1、洋葱皮中黄酮类化合物的提取 将洋葱外皮洗净置于干燥箱中干燥3h，取出用研钵研碎成20目。准确称取约1.80g洋葱皮用滤纸包裹置于索氏提取器中，用体积分数为60%的乙醇溶液（80ml）回流萃取3次，每次50min，合并3次的萃取液，然后用60%乙醇溶解并定量转移至100ml容量瓶定容摇匀待检。 2、芦丁标准液的配制：用分析天平准确称取10.0mg芦丁对照品置于烧杯中，用60%乙醇溶液溶解（低温加热加快溶解）并定容于100ml容量瓶中质量浓度为0.100mg/ml。 3、洋葱皮提取物中总黄酮的定量分析 （1）绘制芦丁对照品的标准曲线 用吸量管分别吸取0,1.0ml,2.0ml,3.0ml,4.0ml,5.0ml,芦丁标准液于5只10ml的容量瓶中，各加入NaNO2溶液0.5ml,摇匀放置6min，再加入AlCl3溶液0.31ml，摇匀放置6min，加入NaOH溶液4ml，然后用60%乙醇溶液定容，放置15min。 （2）将芦丁标准液置于比色皿中，用紫外分光光度计扫描其最大吸收峰，并在其最大吸收峰对应的最大波长处测定吸光度（本实验测定的最大吸收峰对应的最大吸收波长为516nm) 注：以60%的乙醇溶液为空白对照。 （3）洋葱皮提取物中总黄酮的测定 用吸量管吸取3.0ml洋葱提取物于25ml容量瓶中，按以上步骤 显色并测定溶液的吸光度。 六、数据计算及处理 洋葱皮称量记录：1.80g 洋葱皮提取物的吸光度A：0.4099 序号 试样名称 芦丁标准试样 参比溶液 样品 项目 1 2 3 4 5 6 洋葱皮内黄酮含量 1 取用量/ml 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 0.00 3.00 2 吸光度/A 0.4058 0.4067 0.4075 0.4084 0.4092 0.00 0.4099 3 含黄酮的量/mg 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.00 0.4833 4 稀释后黄酮的质量浓度mg/ml 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.00 0.058 七、绘图与计算 （1）以芦丁的质量浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制芦丁对照品的标准曲线图。 （2）于标准曲线图上查出与洋葱皮提取物吸光度A相应的芦丁的质量浓度计算洋葱皮中总黄酮含量及质量分数。 计算：将洋葱皮提取物的吸光度0.4099代入由芦丁标液吸光度-浓度曲线得出的函数式Y=0.40497+0.085X，得出洋葱皮提取物的质量浓度为0.058mg/g。 黄酮类物质含量（mg/g)=CxVxN/M C--样品质量浓度 =[0.058x100x25/3]/1.8 V--定容容积（ml) =26.85mg/g M--洋葱皮粉末质量（g） N--稀释倍数 样品中黄酮化合物的制得率： E=[m/(1x1000)]x100% =[26.85x1.8/1000]x100% =4.828% 结论：本实验用的洋葱为紫皮洋葱，紫皮洋葱皮中黄酮的参考含量为46.7mg/g。经计算本实验洋葱皮提取物中黄酮含量为26.85m