HPLC法测定内源性活性硫方法的建立及其在雄黄、雄黄和甘草次酸联合用药对小鼠体内活性硫水平影响研究中的应用.pdf

目 录 一、摘要 中文论著摘要??????????????????????????1 英文论著摘要??????????????????????????5 二、英文缩略语???????????????????????????10 三、论文 前言??????????????????????????????11 材料与方法???????????????????????????13 实验结果????????????????????????????16 讨论??????????????????????????????35 结论??????????????????????????????37 四、本研究创新性的自我评价?????????????????????38 五、参考文献????????????????????????????39 六、附录 综述??????????????????????????????41 在学期间科研成绩????????????????????????49 致{射??????????????????????????????50 个人简介????????????????????????????51 万方数据 ·中文论著摘要- HPLC法测定内源性活性硫方法的建立及其在雄黄、 雄黄与甘草次酸联合用药对小鼠体内活性硫水平影响 研究中的应用 刖 舌 活性硫广泛参与神经系统、心血管系统、呼吸系统、消化系统、氧化应激、 细胞代谢、炎症反应及癌症等众多病理生理调节过程，在生物体内发挥着重要的 生物学作用。目前已有的活性硫检测方法检测灵敏度较低，特异性较差，因此， 建立准确、高通量的分析方法测定生物样品中活性硫水平成为研究的重点和焦点。 内源性硫化氢(hydrogen sulfide，HzS)为小分子物质，游离H2S是一个具有 两个酸解离常数的弱酸，所以，其在体内有两种存在形式，分别是1／3以H2S气 体分子形式、2／3以硫氢化钠(NaI-IS)形式存在，Naris既是H2S的供体，亦是 H2S的生成前体，两者之间形成一种动态平衡。生物体内H2S的存在形式根据周 围环境的pH值不同而不同，在生理条件下，约20％的硫化物是H2S形式，当pH 值为9．5时，游离H2S则主要以HS。，即活性硫形式存在。 雄黄(Realgar)为含砷中药，具有解毒杀虫，燥湿祛痰，截疟的功效。临床 应用广泛，疗效显著，是国务院在《医疗用药毒性药品管理办法》中特别规定的 28种毒性中药之一，临床上因不规范(超量或长时间)服用含雄黄中成药常导致 全身多系统损害，以肝脏、肾脏、神经系统及皮肤损害为主。目前，氧化应激和 氧化损伤学说在慢性砷中毒发病机制的研究中已经得到普遍认可。近年来研究表 明，甘草次酸(Glycyrrhetinic Acid，GA)具有抗肿瘤、抗炎抗菌、抗病毒、抗心 血管疾病、免疫调节、保护肝细胞、抗氧化及肾上腺皮质激素样作用等多方面的 药理作用和生物学活性，能明显增强肝肾的解毒功能和脑保护作用，且甘草对雄 黄有一定的解毒作用。 综上所述，本研究建立了溴甲烷柱前衍生化．高效液相色谱．紫外检测法 (MBB—HPLC．UV)检测生物样品中活性硫水平的方法，探讨各组织器官中活性 万方数据 硫对雄黄的敏感程度，及甘草次酸对雄黄的解毒作用，为进一步阐明雄黄所致药 源性毒性作用物质基础的研究及早期预防提供理论依据和实验数据，同时为中成 药中甘草与雄黄的配伍机制研究提供理论基础。 材料与方法 中国医科大学实验动物部提供SPF级雄性ICR小鼠70只，体重20士2 g。正 式实验前适应性饲养1周，按照体重分层随机分为7组，每组lO只。以O．5％羧 甲基纤维素钠(CMC-Na)水溶液为混悬介质，第1组为对照组(0．5％CMC-Na水溶 液)，第2~4组为低、中、高剂量雄黄染毒组，分别灌胃给予雄黄混悬液0．15 g／kg、 0．45 g／kg、1．35 g／kg，第5组为甘草次酸对照组，灌胃给予甘草次酸48 mg／kg， 第6’7组为甘草次酸低、高剂量干预组，分别灌胃给予甘草次酸(16 mg／kg)+雄黄 (1．35 g／kg)、甘草次酸(48 mg／kg)+雄黄(1．35 g／kg)。灌胃每日1次，每隔3天 称量体重1次，调节灌胃容量，染毒8周。最后一次灌胃24 h后，无水乙醚麻醉， 眼眶取血，冰浴下取大脑，心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏及睾丸组织，预冷0．9％ 生理盐水冲洗干净待用。 第一部分实验：MBB柱前衍生化．HPLC．UV法测定生物样品中活性硫含量方 法的建立与方法学确证。 第二部分实验：采用MBB柱前衍生化一HPLC-UV法测定雄黄及其与甘草次酸 联合用药小鼠血浆、脑、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏及睾丸中活性硫含量。 所得数据用SPSS 17．0进行数