转基因水稻多重PCR和Real―time PCR定性检测中的问题与策略.docVIP

转基因水稻多重PCR和Real―time PCR定性检测中的问题与策略 摘要：随着转基因水稻研究在世界范围内的研究和开发，以及转基因水稻商业化的争议性加剧，相关部门对粮食安全、食品安全更加关注，农业科研单位检测转基因水稻也将具有重要意义。参照农业部的质检标准书和转基因PCR检测中的实践经验，对抗虫转基因水稻在转基因检测中可能出现的问题进行了技术层面和理论层面分析;同时对转基因抗虫水稻的启动子、终止子、内参基因、靶基因等几个元件的检测分别进行探讨，并重点分析了启动子和终止子的检测工作，根据研究者的工作经验报道，从植物病毒学原理和植物基因工程的理论角度，提出了对转基因PCR定性检测中可能遇到问题的解决方案。 关键词：转基因水稻;定性检测;启动子;终止子;Bt基因;多重PCR;Real-time PCR 中图分类号：Q78;S511 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）02-0262-04 DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.02.002 Problems and Strategies Qualitatively Detecting Genetically-modified Rice with Multiplex PCR and Real-time PCR QIU Juan （Food Crops Research Institute，Hubei Academy of Agricultural Sciences，Wuhan 430064，China） Abstract： As genetically-modified（GM） rice will be commercialized， qualitatively detecting GM rice becomes more and more important. Based authors’ practice in detecting of transgenic Bt rice with the quality standard of Chinese Ministry of Agriculture， the potential problems were analyzed from technical level and theoretical perspective. The detection of transgenic components （promoter， terminator， reference gene and target gene etc） of GM rice with PCR was discussed. The possible solutions were proposed from the principles of plant virology and genetic engineering based on previous reports. Key words：genetically-modified（GM） rice;qualitative detection;promoter;terminator;Bt gene;multiplex PCR;real-time PCR 转基因技术应用于作物以来，转基因产品如玉米、大豆、棉花等都已有商业化的品种问世;目前在世界上使用最多的转基因商业化基因是抗除草剂基因和Bt杀虫基因。而水稻作为一种主粮，商业化步伐远远慢于这几种作物;目前最有可能商业化的转Bt杀虫基因的是中国与国际水稻所合作研制的“华恢1号”、“Bt汕优63”和欧洲研制的富含维生素A的Golden rice[1，2]。 自从国家给转基因水稻发放了安全证书，转基因水稻的商业化成为了热门的议题。目前农业部发放安全证书的转基因水稻有抗虫转基因水稻“华恢1号”和“Bt汕优63”，国家制定了关于作物和转基因水稻的检测方法标准[1，3]。国家质量检测部门有完善的种子和食品检测系统，来定性检测是否含有转基因成分。但是随着转基因水稻即将大规模的种植，科研人员在研究和育种过程也有大量的样品需要检测，主要目的有以下几个：①更好地进行常规品种转基因育种工作，防止转基因的品种污染常规品种，保持种质的纯合，同时检测转基因的水稻在田间有没有发生漂移;②节省人力物力，大量的水稻样品送到专门的质检部门检测价格昂贵;③有些检测样品中的转基因成分元件，是超出国家质量标准检测范围的。 转基因作物和转基因食品的检测方法有很多，例如PCR、Southern Blot、基因芯片等[4-7]。常规和便捷的方法是普通PCR以及由其衍生出的半定量PCR方法[8，9];在国内外使用的最多定性作用更强的是Real-time PCR[