试管法和卡式微柱凝胶法检测孕妇血清IgG抗AB效价的比较分析.docVIP

试管法和卡式微柱凝胶法检测孕妇血清IgG抗AB效价的比较分析 　　摘要：目的 探讨试管抗人球蛋白法和卡式微柱凝胶法检测孕妇IgG抗A（B）效价比较。方法 选择163例丈夫为A型或B型 的O型孕妇血清经巯基乙醇（2-Me）中和后，分别用试管抗人球蛋白法（试管法）和卡式微柱凝集法（卡式法）检测IgG抗A（B）效价。结果 试管法和卡式法检测孕妇IgG抗A（B）效价结果比较，差异有显著性意义（P0.05），163 例O型孕妇中，卡式法检测的IgG 抗A（B）≥1∶64为69.9%，显著高于试管法检测的结果35.5%。结论 卡式法检测孕妇抗体效价简单、快捷，其灵敏度远高于试管法，应根据不同实验方法确定相应的参考值。 　　关键词：新生儿ABO溶血；抗体效价；卡式微柱疑胶 　　新生儿溶血病（HDN）系指母、子血型不合，母体由于免疫刺激产生了抗胎儿红细胞抗原的抗体，致使胎儿红细胞寿命缩短或破坏的疾病。有报道ABO溶血病占新生儿溶血的85.3%，Rh溶血病占14.6%，MN溶血病0.1%。ABO血型不合中约1/5发病，Rh血型不合者约1/20发病[1]。ABO溶血主要发生在第一胎，胎儿从父亲遗传基因继承了A或B抗原而母亲不含有相应的抗原者，由于O型孕妇IgG类抗体效价比其它血型高，因此O型孕妇和非O型胎儿更容易发生新生儿溶血病，临床主要表现为黄疸、贫血或伴心力衰竭。由于只有IgG类抗体才能通过胎盘进入胎儿血液循环，引起新生儿溶血病，因此孕妇血清IgG抗A（B）效价检测可为HDN预防、诊断以及治疗提供有价值的依据。当孕妇血清中IgG抗A（B）效价≥64时，胎儿有可能发生HDN，当测定效价≥128时，胎儿发生HDN的可能性更大。由于血清中同时存在IgM类天然抗体及IgG类免疫性抗体，因此需用二巯基乙醇（2-Me）中和掉IgM抗体后，再检测IgG抗体的效价。本文主要用二巯基乙醇（2-Me）中和掉IgM抗体后，分别用试管法和卡式法检测IgG抗A（B）效价，并进行比较，现报道如下。 　　1资料与方法 　　1.1一般资料 2008～2012年在本院产科门诊做产前检查孕妇163例，丈夫为A型或B型，孕妇为O型，所有受检者均无输血史。 　　1.2仪器及试剂 2-Me、抗人球蛋白试剂由上海市血液中心提供；微柱凝胶卡由瑞士达亚美公司提供；日本久保田KA2200血库专用离心机和达亚美专用离心机；A、B、O型各十人份献血员红细胞混合并洗涤分别配制成3～5%的A型、B型、O型悬浮红细胞。 　　1.3方法 检测丈夫血型为A型或B型，孕妇为O型后，将抽取的不抗凝孕妇血液标本37℃孵育30 min，待血清析出后用久保田KA2200离心机以3000 g离心力离心5 min，分离出血清备用。取分离出的300 μL血清与300 μL二巯基乙醇于小试管内混合并轻轻震荡摇匀，加塞静置室温30 min。中和完成后的血清用生理盐水倍比稀释，每管300 μL，稀释至第10管（中和后的血清未倍比稀释时稀释度为1∶2）。然后根据实验操作规程分别检测残留的IgM抗体效价、试管法IgG抗体效价以及卡式法IgG抗体效价。 　　1.4结果判断 IgG抗体效价IgM效价二管（4倍）或以上时，结果有效。 　　1.5统计学方法 应用SPSS19.0统计软件，对两种方法检测结果采用配对t检验。 　　2结果 　　试管法与卡式法检测IgG抗体效价的比较，见表1。 　　3讨论 　　HDN是因母体内存在与其胎儿血型不合的IgG类免疫性抗体引起的新生儿或胎儿溶血的同种免疫性疾病，是新生儿病理性黄疸最常见的原因之一。对夫妇ABO血型不合且血清中IgG类抗A（B）效价≥64的孕妇，胎儿出生后应尽早进行ABO抗体游离及放散实验检查，确认新生儿是否存在ABO溶血，为临床医生尽早治疗提供可靠的实验依据。IgG抗体是唯一能够通过胎盘并致新生儿溶血的抗体，因此孕妇ABO抗体效价指的是IgG抗A（B）效价，而孕妇血清中的抗A（B）抗体同时含有IgM及IgG抗体，因此要单独测定IgG抗A（B）必须先去除IgM抗A（B）的干扰。IgM分子由5个轴射状排列的亚单基组成，亚基间以二硫键相连，亚基间的二硫键比亚基内链间与链内二硫键容易被巯基试剂破坏，经巯基试剂处理后，IgM失去原来的血清学性质[2]。使用0.2mol/L的2-Me 37℃水浴10 min处理血清结果较理想，既能有效灭活IgM，又能保持IgG较高效价，有利于IgG抗A（B）的检出，并且有效地缩短了操作时间[3]。妊娠期间动态监测孕妇血清中IgG抗A（B）效价的变化，有异常者配以中西医治疗，可以有效地预防和减少HDN的发生[4]。试管抗人球蛋白法作为一种经典的IgG抗体检测技术，为免疫性抗体的检测技术的发展奠定了坚实基础，但该实验要求操作人员有丰富的临床实验操