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黄芩苷对LPS诱导肠道损伤的保护作用研究 　　摘要 目的：探讨黄芩苷对内毒素-脂多糖（LPS）引起的肠损伤的肠黏膜保护作用及黄芩苷对脓毒血症小鼠回、结肠黏膜抗氧化损伤的保护作用。方法：健康雄性BALB/c小鼠50只随机分为5组：正常对照组、模型组、黄芩苷高、中、低剂量组。分别灌胃双蒸水、黄芩苷100，50，25 mg·kg-1，每日1次，连续3 d，于第3天灌胃后1 h，腹腔注射生理盐水或LPS（17 mg·kg-1），于腹腔注射LPS后20 h处死小鼠，取回、结肠组织。观察各组小鼠生活、精神状态，记录各组小鼠死亡率，取材后测量结肠长度；光镜下根据Chiu肠黏膜损伤评分方法对肠组织进行分级，以HE染色方法观察肠组织病理学变化；采用紫外分光光度法检测肠组织匀浆液总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）；免疫组化染色方法分析各组肠组织PCNA的表达。结果：小鼠腹腔注射LPS后，出现死亡现象，黄芩苷给药组死亡百分率明显低于模型组。黄芩苷中剂量组小鼠结肠长度较模型组显著增加（P0.05）；肠黏膜损伤程度较模型组显著降低，回、结肠的高剂量组损伤较模型组显著降低（P0.05），回、结肠的中、低剂量组损伤较模型组显著降低（P0.000 1）；中剂量回肠匀浆液T-AOC，T-SOD，GSH-PX较模型组显著增加（P0.05）；黄芩苷组较模型组PCNA表达无显著性差异。结论：黄芩苷有保护肠上皮细胞免受氧自由基损伤的能力，其通过改善肠黏膜结构与功能减轻LPS引起的肠道损伤。 　　关键词 脓毒症；黄芩苷；肠保护 　　收稿日期 2013-03-19 　　基金项目 国家自然科学基金项目；广东省科技计划项目（2011；广东省建设中医药强省项目；湛江市科技攻关项目（2009C3104003） 　　通信作者 *郑学宝，博士，教授，Tel：（0759）2388405， E-mail： xuebaozheng@ 　　作者简介 吴琼，硕士，Tel：（0759）2388405，E-mail：wqzs2006@163.com 　　脓毒症是指各种致病微生物或其毒素存在于血液或组织中，机体对感染的一种全身炎症反应综合征（SIRS），可进一步演变为感染性休克，多器官功能障碍综合征（MODS），当前危重病患者死亡的主要原因之一[1]。随着危重症的发展，在许多危重病人后期出现严重的感染，其主要的原因与缺血、缺氧等因素导致的肠屏障损害有关。肠黏膜屏障功能障碍、细菌移位在MODS的发生机制中也受到重视。有研究认为胃肠道是MODS的始动器官[2]，从炎症反应的角度，肠道在MODS的发病中不仅是损伤的靶器官，更是启动器官[3]。有研究表明黄芩苷对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌等受试菌均有不同程度的抑菌和杀菌作用，抗菌谱广且抗菌作用强[4]。故本研究通过建立LPS诱导的脓毒血症模型，从而探讨黄芩苷各剂量组对LPS引起的肠损伤的肠黏膜保护作用。 　　1 材料 　　1.1 动物 健康雄性BALB/c小鼠，体重（22±3） g，SPF级，50只，由广东医学院实验动物中心提供。 　　1.2 药物与试剂 LPS（L-2880：B5），购自Sigma公司；黄芩苷提取物，纯度﹥85%，购自南京泽郎医药科技；总抗氧化能力（T-AOC）测定试剂盒、总超氧化物歧化酶（T-SOD）测定试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）测定试剂盒、考马斯亮蓝测总蛋白含量试剂盒、松木素伊红染色液，均购自南京建成；PCNA鼠抗、山羊抗鼠二抗、DAB染色液，购自北京中杉金桥。 　　1.3 仪器 BM-V型组织包埋机、生物组织摊片烤片机（湖北医用电子仪器）；Leica RM2315型石蜡切片机（德国莱卡）；光学显微镜（日本尼康）；752型紫外分光光度计（南京麒麟分析仪器有限公司）。 　　2 方法 　　2.1 模型建立和分组 将雄性BALB/c小鼠随机分为5组：正常对照组、LPS模型组、黄芩苷高、中、低剂量组。每组分别以双蒸水（10 mL·kg-1）、黄芩苷高、中、低（100，50，25 mg·kg-1）灌胃，每日1次，连续给药3 d，灌胃1 h后，对照组腹腔注射生理盐水（10 mL·kg-1）、其他组腹腔注射LPS（17 mg·kg-1）。 　　2.2 取材 各组小鼠于腹腔注射LPS后20 h处死，取回肠、结肠各1～2 cm，福尔马林固定，其余肠组织于-80 ℃冰箱保存备用。 　　2.3 小鼠死亡百分率 腹腔注射LPS后观察小鼠精神状态以及行动能力，记录其休克后死亡数量所占每组实验动物的百分率。 　　2.4 结肠长度 处死小鼠后，立即剖腹切取距小鼠直肠1 cm处到距盲肠1 cm处的全