- 1、本文档共50页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
2、T-DNA标签克隆基因 利用T-DNA插入突变 创造突变体,获取目 标基因或克隆 T-DNA 载体构建 转化植物(T1,T-DNA杂合子)收获T2种子 筛选T2,获突变子,应为3:1分离 确定T-DNA与突变型共分离的个体 产生纯合后代 克隆T-DNA两侧的植物DNA 利用侧翼DNA序列作探针从cDNA文库中钓取基因 基因功能的验证(遗传互补测验,分离的 野生基因转化突变体,回复功能) 图12-12 T-DNA标签克隆基因的基本原理 3、基于PCR的基因克隆 PCR可在数小时内使目的基因片段扩增到数百万个拷贝,可代替一些经载体克隆基因的方法。其原理是根据待扩增基因的序列合成引物,使两个引物序列之间的基因序列获得大量扩增,产生大量的基因拷贝用于研究 4、基因的人工合成 对于已知核苷酸序列、分子量较小的基因可以通过化学合成法制备基因。一般先一段一段地合成,然后将这些小片段连接起来。人工合成基因可以由DNA自动合成仪来完成 四、重组DNA分子 第三节 外源基因的导入 一、农杆菌介导的遗传转化 1、根癌农杆菌(Ti质粒) 2、发根农杆菌(Ri质粒) 发根农杆菌侵染后植物细胞产生许多不定根,这种不定根生长迅速,不断分枝成毛状,故称之为毛状根(发状根) Ri质粒的结构与Ti质粒的结构很相似,可以分为T区、vir区、ori区和其它区域等几个部分。 T区与Ti质粒的T-DNA十分相似,包括①T区的左右边界序列;②TL-DNA区;③TR-DNA区。 图12-15 棉花转基因植株生产过程 F 1. 共培养 2. 在选择培养基上筛选 3. 筛选获得的抗性愈伤 5. 胚萌发成苗 6. 转基因植株移栽大田 4. 抗性愈伤分化成胚状体 * 第十二章 遗传工程 第一节 遗传工程概述 遗传工程广义:细胞工程、染色体工程 细胞器工程、基因工程 酶工程、发酵工程 狭义:基因工程 基因工程概述 基因工程是20世纪70年代初随着DNA重组技术的发展应运而生的一门新技术。 →1982年经美国食品及药物管理局批准 ,采用基因工程方法在细菌中表达生 产的人的胰岛素进入市场,成为基因 工程产品直接造福于人类的首例 →1985年转基因植物获得成功 →1996年克隆羊诞生。 →现在,人类已利用这一技术改造和创 建新的生命形态、生产药品、疫苗、 牛奶和食品,诊断和治疗遗传疾病。 基因工程的基本步骤: 1.目的基因的分离或合成 2.将目的基因与载体DNA连接,构建重组DNA分 子-表达载体 3.将重组DNA分子导入受体细胞,并获得具有外 源基因的个体 4.转基因生物的检测与鉴定 5.转基因生物的安全性评价 第二节 基因的分离 基因分离(克隆)包括3个步骤: 1. 目标DNA片段(基因)的分离 2. 目标基因克隆到载体上 3. 载体导入宿主细胞并在其中大量 复制 一、工具酶 1、限制性内切核酸酶 限制酶:作用于特定(异)核苷酸序列 的磷酸二脂酶 Ⅰ型酶:仅EcoB和EcoK两种,催化限制 性切割和修饰核苷酸2种功能 Ⅱ型酶:遗传工程中应用最广泛 Ⅲ型酶:具有特异的识别位点,识别位 点是非对称的 Ⅱ型限制性酶的基本特性: ① 有特异识别和切割的序列部位 ② DNA分子上两个单链断裂的部位通 常不是直接相对的 ③ 断裂所形成的DNA片段常具有碱基 互补的单链尾巴(粘性末端) ④ 内切酶的切割和修饰功能由两个 不同的酶催化所完成,即内切酶 活性和甲基化作用活性是分开的 限制性内切酶EcoRI的酶切位点及酶切产物连接 回纹序列 图12-1通过用相同的限制性内切酶切割 形成一个重组DNA分子 限制性内切酶SmaI的识别及酶切位点 平齐末端 2、DNA连接酶 DNA连接酶是重组DNA分子构建必不可少的工具酶,能催化DNA中相邻的3’ –OH和5’ – 磷酸基末端之间形成磷酸二酯键并把两段DNA连接起来 3、反转录酶 反转录酶是一类以RNA为模板来指导DNA合成的DNA聚合酶,故又称依赖于RNA的DNA聚合酶 通常用反转录酶构建cDNA文库(cDNA library) 4、聚合酶链式反应(PCR) PCR是体外快速扩增DNA的方法,由美国的Mullis(1986)发明, 1993年诺贝尔化学奖 PCR可对特定DNA片段进行扩增,且可用痕量DNA作模板,对DNA纯度要求也不高,可在几小时内使目的基因片段扩增到数百万个拷贝 PCR反应在一种混合液中进
您可能关注的文档
- 西点管理培训视听技术高级培训汇编.ppt
- 遗传实验4动物细胞减数分裂详解.ppt
- 遗传实验05:人外周血培养与染色体制备-新详解.ppt
- 遗传实验11、12诱变物质的微核测试(综合)详解.ppt
- 遗传实验精详解.ppt
- 遗传算法及简单应用实例详解.ppt
- 遗传信息的携带者──核酸详解.ppt
- 遗传信息的携带者——核酸详解.ppt
- 遗传信息的携带者详解.ppt
- 遗传性球形红细胞增多症的诊断及治疗详解.ppt
- 2023四年级数学下册 一 平移、旋转和轴对称第2课时 旋转教案 苏教版.docx
- 2023四年级数学下册 三 快乐农场——运算律 信息窗1 加法运算定律第1课时教案 青岛版六三制.docx
- 2023六年级数学下册 第2单元 百分数(二)第5课时 解决问题教案 新人教版.docx
- 2023六年级英语上册 Unit 2 Ways to go to school Part B 第二课时教案 人教PEP.docx
- 2023六年级语文下册 第四单元 13 董存瑞舍身炸暗堡配套教案 新人教版.docx
- 2023四年级数学上册 二 繁忙的工地——线和角信息窗1 射线、直线及角的初步认识教案 青岛版六三制.docx
- 2023四年级数学下册 6 小数的认识6.docx
- 2024-2025学年一年级道德与法治上册 第一课 开开心心上学去教学设计+教案+素材 新人教版.docx
- 2023四年级数学上册 三 保护大天鹅——三位数乘两位数相关链接 积的变化规律说课稿 青岛版六三制.docx
- 2023八年级语文上册 第五单元 写作 说明事物要抓住特征教案 新人教版.docx
文档评论(0)