第十三章基因药物分析幻灯片.pptVIP

? 空白和对照： 通过不加酶，或不加底物，或二者都加（但酶需经过失效处理）； 空白是指杂质反应和自发反应引起的变化量； 提供未知因素的影响。 对照是指用纯酶或标准酶制剂测得的结果，主要用于比较或标定。 ii) 常用方法有： 适当条件下 将酶和底物混合 ① 测定生成一定量产物所需的时间，即终点法 ② 隔一定时间，间断或连续地测定反应变化 ③ 反应一定时间后停止反应，定量测定底物减少或产物生成的量 i) 包括物理法、化学法和酶分析法 4. 测定方法： 按取样和检测方式分为取样测定和连续测定： ★ 取样测定 酶反应开始后不同的时间，取出一定量反应液，并用适当的方法停止其反应后，对产物和底物进行定量分析，求得单位时间内酶促反应变化量的方法。 加入酶变性剂 加热使酶变性 基于底物和产物在物理化学性质上的不同，在反应过程中对反应系统进行直接连续检测的方法。 ★ 连续测定 ② 几乎所有酶反应都可根据产物或底物的化学性质找出具体测定方法 取样测定法目前仍广泛采用，这是因为： ① 它不需要特殊仪器； ③ 由于色源底物和荧光源底物的发展，可在原来的底物分子上接上相应的有色基团、发色基团或荧光基团。 从准确性和测定效率看，连续法都比取样测定好。 ★ 检测方法： 常用UV-Vis和荧光分光光度法 ? UV-Vis分光光度法： ? 荧光分光光度法 如：细胞色素氧化酶的底物为细胞色