医学分子生物学大学课件.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * （三）基因诊断由于重组DNA技术的问世,人们对于许多疾病的认识,已经深入到基因水平。一种从基因水平对疾病进行诊断的新技术──基因诊断技术得以诞生和发展。基因诊断：在DNA水平或RNA水平,应用核酸分子杂交技术、限制性内切酶长度多态性（RFLP）连锁分析、PCR技术、DNA序列分析技术以及近年发展起来的DNA芯片技术等,对人类疾病进行诊断。 * * ★基因诊断技术——核酸分子杂交：Southern 印迹杂交技术：1975年，Southern EM发明。从生物体的细胞中提取基因组DNA，并从中鉴别出某一特异的核苷酸序列。Northern印迹杂交技术：1977年Alwine JC等发明。用于样品中某种mRNA分子的定量，分子量大小的测定。原理：RNA分子在变性琼脂糖凝胶中电泳，按分子量大小不同而相互分离，其原理与Southern转移技术的方法类似。 细胞原位杂交技术：1969年，Pardue等建立。 * * ★基因诊断技术——聚合酶链式反应 polymerase chain reaction, PCR ： 1985年，Mullis K首创。 体外模拟细胞内DNA复制过程，进行体外基因扩增。 * * ★基因诊断技术——基因芯片（Gene chips）技术：基因芯片技术: 将大量探针固定于支持物上，与标记的样品进行杂交。可一次性对样品中大量序列进行检测和分析。解决了传统核酸杂交技术操作繁杂、检测效率低的问题。通过设计不同的探针阵列和使用特定的分析方法，使该技术具有多种不同的应用价值。如基因表达谱分析、基因突变检测、多态性分析、基因诊断等。 * * 叠加图：绿色代表下调；红色代表上调 ；黄色无差异。 正常样品 Cy3标记 待测样品 Cy5标记 叠加 石奕武，胡维新等：多发性骨髓瘤的基因表达谱分析， 湖南医科大学学报，2003，28（3）：201－205 * * * * ★基因诊断的其它技术： DNA序列分析技术（DNA sequencing）； 限制性内切酶长度多态性（RFLP）； PCR-SSCP等。 * *在法医学中利用DNA指纹图谱技术进行刑事侦破和亲子鉴定。临床上对遗传病、传染病及常见疾病（如肿瘤、心血管疾病等）的诊断。基因分型。基因诊断是通过直接检测目的基因（或该基因的转录产物）的存在状态对疾病作出诊断的方法。 基因诊断的用途 * *基因诊断技术不仅用于出生后人群的疾病诊断,而且还应用于产前基因诊断和着床前诊断，这样可大大减少有先天性疾病或携带遗传性疾病基因的胎儿出世，促进优生优育，提高人口素质。 产前基因诊断和着床前诊断 * *基因诊断技术也为流行病学调查以及食品卫生检验和环境卫生监测等工作开创了崭新的领域, 使诊断技术进入一个新的、更高的水平,从而刷新了医学诊断的面貌。 * * 四基因治疗gene therapy基因治疗是分子生物学理论与技术的飞速发展给医学带来新的希望和新的治疗手段，开辟了治疗学therapeutics的新纪元。基因治疗是临床医学中发展起来的新领域，发展十分迅速。 * *基因治疗技术的发展与整个医学科学的发展以及许多分子生物学新理论、新技术、新方法的应用密切相关。临床基因治疗研究已经得到了迅速发展，基因治疗的范围从单基因缺陷遗传病扩大到多基因遗传病（恶性肿瘤、心血管病、免疫性疾病等）以及传染性疾病（如肝炎、艾滋病等）。 * *狭义基因治疗：目的基因导入靶细胞后与宿主细胞内的基因发生整合、成为宿主基因组的一部分，目的基因表达产物起治疗疾病的作用。广义基因治疗：包括通过基因转移技术，使目的基因得到表达，封闭、剪切致病基因的mRNA，或自杀基因产物催化药物前体转化为细胞毒性物质，杀死肿瘤细胞，从而达到治疗疾病的目的。随着人类基因组遗传信息的全部破译和基因功能的澄清，临床医生有可能根据病人的需要，将外源基因导入患病的细胞，替换有缺陷的基因以治疗疾病。在新的世纪，可以预期基因治疗将会有一个更大的发展。* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * *对DNA片段的一级结构进行分析，导致一系列重大发现： 4. 从cDNA序列推导出蛋白质的一级结构；1. 断裂基因split gene的发现，证明真核细胞的 基因不是连续的DNA片段； 2. 前体mRNA分子的拼接，去除内含子序列，连接成 成熟mRNA； 3. 发现单基因遗传病的基因结构的变异； 5. 根据DNA序列合成基因，并与载体连接，使之在细菌中表达，合成活性蛋白质，开创了基因工程。 * * 6. 基因的人工合成1978