人克罗恩氏病与奶中副结核菌―人类关注的热点.docVIP

人克罗恩氏病与奶中副结核菌―人类关注的热点摘要：副结核分枝杆菌能引起反刍动物的慢性肠炎，并有学者提出它也是引发人克罗恩氏病的病原体，但其传播途径目前仍然不是十分明确，然而有些证据却表明人感染此菌是因为食入了污染副结核分枝杆菌的牛奶而遭受感染的，就目前而言，巴氏灭菌是否可以有效的杀灭污染奶样中的菌体，仍是未知数。我们以前已经做过在牛奶中添加副结核菌，通过高温短时的巴氏灭菌（72℃，15s）处理后，发现已经检测不到菌的存在。但是副结核菌是细胞内的病原体，在巨噬细胞中存活，并且呈丛状生长。估计在奶中可以躲避杀灭而残存下来。最近一篇关于爱尔兰的零售奶样本的报道指出副结核菌已成功的从奶样本中培养成活。关键词：副结核菌；Johnes病；牛奶；巴氏灭菌1895年Johne和Frothingham首次报道了牛副结核菌，他们从严重感染肠炎的牛肠道中，成功分离出抗酸染色的细菌，接着证明它是引发反刍动物肉芽肿肠炎的病原体，副结核菌临床表现为极其复杂的无法治愈的腹泻、渐进性消瘦并最终死亡。发病时，肠道变皱增厚，不能正常的吸收营养。牛感染途径是通过母体子宫及接触和吸食了副结核菌污染的粪便和奶，但直到3～5岁时才有临床症状，应激反应如分娩、哺乳或寄生虫可以加速临床症状的出现。副结核病引起的经济损失也是巨大的，如在美国有20～40%的奶牛受到感染，有亚临床症状的牛会增加乳腺炎的发生导致产奶量下降。并且本病无特效药进行治疗，唯一减少损失的方法是通过临床进行淘汰和净化。1副结核菌引发的争议1.1副结核菌对人类的影响 副结核菌是否是人类的病原菌仍处于争议阶段，但有大量的资料表明，人的克罗恩氏患者中确实分离到副结核菌的存在。而目前感染此菌的奶和肉制品是否存在潜在的危害也不太清楚，本篇讨论的主题是：存在于奶中的副结核菌对消费者有危害吗？巴氏灭菌后副结核菌能残存下来吗？副结核菌是人克罗恩氏病的病原吗？首先证实第一个问题：存在于临床症状和亚临床症状的牛粪便和奶中的副结核菌浓度很低（5～8CFU/50mL的奶），此外有副结核菌的奶也仅发生于个体动物，在加工厂，从许多农场收集到的奶要混在一起，这就进一步稀释了副结核菌的浓度。在1996年，美国一家实验室承担了国家动物健康监测任务：牛奶监测，即关于美国副结核病在牛场传播的综合性研究，在血清学分析的基础上，69个牛场通过血清学分析检测到副结核菌阳性，他们每隔2w收集一次罐装奶样本，持续6w。船运冷冻送达实验室培养和PCR分析，在培养12w后，发现没有副结核活菌存在，并且PCR检测也为阴性。得出的结论是：奶中的副结核菌已被稀释到两种方法均检测不到的浓度。但是奶牛场中，粪便中有大量副结核菌污染奶而使菌残留下来，仍是一个值得关注的热点问题。从克罗恩氏患者的肠组织中检测到的分枝杆菌有：偶发分枝杆菌病、多胞内分枝杆菌、龟分枝杆菌病和堪萨斯分枝杆菌病，同时也分离培养出副结核分枝杆菌，并通过PCR和DNA序列鉴别出来。1.2克罗恩氏病的确诊 因为克罗恩氏病的临床症状与副结核病的晚期症状类似，所以有研究者提出副结核菌可能是引发本病的罪魁祸首，有两篇文章描写了从克罗恩氏患者的肠组织中发现了特异的副结核菌的DNA序列，但大部分的研究却表明在克罗恩氏患者中并未检测到副结核菌。克罗恩氏病和副结核菌的潜在的联系，对奶牛场来说已经成为一个不可回避的问题。自从1994年美国报道了在零售巴氏灭菌奶中培养出副结核菌的研究后，表明巴氏灭菌奶后残存的副结核菌会缓慢的生长，但是副结核菌在65℃30min和72℃15s加热处理后，副结核菌能否残存下来的研究结论是高度有争议。因为副结核菌是一个潜在的动物传染病的病原体及它与克罗恩氏病的联系特性，原奶中副结核菌灭活所需的最佳时间和温度条件的研究是目前的热点项目。2实验研究2.1巴氏灭菌奶的评估 接下来的工作是去评估两种巴氏灭菌奶即标准方法（63.5℃30min）和高温短时（HTST）杀灭副结核菌的效果，在这个研究中接种了104或107CFU/mL的副结核菌，然后进行上述的处理，对两种方法来说，副结核菌的数量都明显的减少，然而，在每一系列的试验中，奶中仍有残留的副结核菌存活下来。其中一个原因可能是实验时热穿透力不够，因为HTST巴氏灭菌奶是模拟商业灭菌的加热和冷却的条件，热交换是通过循环水加热到特定温度并且热处理过程中奶处于静止状态，但商业性的巴氏灭菌奶有系列的管路和盘子，奶在热处理时会有很大的流速，热穿透非常均匀一致。在将奶经过HTST巴氏灭菌后发现奶中仍含有10～103CFU/mL菌体，无论是用固体还是液体培养基都能在最初添加的102～103CFU/mL经72℃15s加热后检出活菌，但是在10CFU/mL 或CFU/50mL的奶中却没有分离到活菌，研究结论是如果奶中的菌数量高于102CFU/mL就有可能存活下来，但低于10