副波长选择对免疫抑制法测定肌酸激酶同工酶活性的影响.docVIP

副波长选择对免疫抑制法测定肌酸激酶同工酶活性的影响 　　[摘要] 目的 探讨副波长选择对西门子ADVIA 2400全自动生化分析仪免疫抑制法测定肌酸激酶同工酶（CK-MB）的影响。 方法 选择不同副波长对溶血、黄疸、脂血等干扰样本和正常对照血清样本进行测定。 结果 副波长宽度的选择对外观正常对照样本血清影响差异无统计学意义（P 0.05）。以405 nm、480 nm、450 nm、505 nm为副波长的双波长法检测血红蛋白、胆红素、乳糜血等干扰样本，干扰样本与对照间差异有统计学意义（P 0.05）。 结论 免疫抑制法检测CK-MB应根据样本干扰物的种类来选择不同的副波长。 　　[关键词] 副波长；CK-MB；血红蛋白；胆红素；乳糜血 　　[中图分类号] R446.1 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）18-0108-02 　　肌酸激酶（Creatine Kinase，CK） 是人体能量代谢过程中的重要酶类，由肌肉（M）型和脑（B）型两种单体亚单位组成，包括CK-MB、CK-MM和CK-BB三种同工酶，其中CK-MB对于诊断急性心肌梗死有重要作用，是应用最广泛的心肌损伤指标之一[1]。目前酶法测定CK-MB活性最常用的是免疫抑制法，研究发现轻微溶血、胆红素、乳糜血对测定结果影响较小，但中度及重度溶血、胆红素、乳糜血会严重影响测定结果.副波长的选择可以消除部分干扰。干扰物对某些生化指标的影响已有文献报道，但不同副波长选择对免疫抑制法测定CK-MB抗干扰的研究较少，本文就副波长的选择测定CK-MB的影响作一些探讨。 　　1 材料与方法 　　1.1 仪器与试剂 　　ADVIA 2400全自动生化分析仪购于德国西门子公司；免疫抑制法CK-MB试剂盒购于宁波美康生物科技股份有限公司，批号游离胆红素及结合胆红素购于百灵威科技有限公司，批号分别为LK50L19和JH10-4286；血红蛋白购于上海瑞齐生物科技有限公司，批号中/长链脂肪乳注射液（C6-C24）购于华瑞制药有限公司，批号：80DH066。 　　1.2 检测方法 　　收集本院生化室2012年2月份外观正常体检标本50份，应用免疫抑制法检测CK-MB活性，所有测定严格按试剂盒说明书进行操作。测试条件如下：温度：37 ℃；比色杯光径为1.0 cm；检测主波长340 nm；样品（校准管以校准品做样品）加R1混匀，37℃孵育5 min后加入R2混匀，37℃孵育2 min，连续监测1～3 min吸光度变化，计算每分钟的吸光度变化，其中样本用量10 μL，试剂1用量200 μL，试剂2用量50 μL。选择好仪器测试程序后，将副波长依次设为无、405、450、480、505、546、570、600、660、700、750 nm，其他参数不变，取正常血清50份测其CK-MB，然后分别制备溶血（游离血红蛋白浓度400 mg/L以上）、脂血（总胆固醇浓度4.8 mmol/L）和黄疸（总胆红素浓度50 mmol/L）干扰标本，选择不同的副波长测定CK-MB活性。 　　1.3 统计学方法 　　采用SPSS 16.0统计软件进行统计学处理。正态分布的计量资料以（x±s）表示，两组间均数比较采用两独立样本t检验，多组间样本均值间差异采用单因素方差分析，P 0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　不同副波长测定干扰样本和正常对照样本结果见表1。当样本外观正常时（无溶血、黄疸、脂血），不同副波长测定结果差异无统计学意义（F=5.00，P=0.6415）。溶血干扰样本在405 nm 副波长的测定结果与对照样本差异有统计学意义（t=3.452，P=0.003）。脂血干扰样本在480 nm 副波长的测定结果与对照样本差异有统计学意义（t=5.124，P=0.000）。胆红素干扰样本，在使用405、450、480、505 nm 副波长时，其测定结果与对照样本相比差异有统计学意义（P均0.05）。 　　3 讨论 　　自动生化分析仪可选择单波长或双波长测定，单波长测定易受溶血、脂浊等因素的干扰， 而恰当组合的双波长测定可通过副波长加以修正， 减少甚至消除干扰因素， 使结果更加可靠，如不合理使用双波长测定则不仅不能消除干扰，甚至会使干扰幅度增强，干扰方向变得混乱[2，3]。 　　CK-MB是应用最广泛的心肌损伤指标之一[1]，其准确测定对于心肌损伤早期诊断及梗死范围大小或再梗死的估计有重要意义。本实验结果显示，当样本外观正常时（无溶血、黄疸、脂血），使用不同副波长的双波长法测定结果差异不大，但当样本受胆红素、血红蛋白、脂血干扰时，结果差异就很明显。胆红素是体内铁卟啉化合物的代谢产物，在血清中有3种存在形式：