第三章 细胞工程基本技术（参考）.pptx

第三章 细胞工程基本技术红河学院生命科学与技术学院陶宏征三个问题如何设计一个细胞工程实验室？第一节 细胞工程实验室的基本结构2. 细胞工程实验室中有哪些东西？第二节 细胞工程实验室的基本仪器设备3. 在细胞工程实验室中干些什么事？（用到那些技术）第三节 细胞工程的基本操作技术第四节 培养基及其配制第一节 细胞工程实验室的基本结构一、实验准备室二、无菌操作室一、实验准备室实验准备室主要用于细胞工程实验的基本准备工作、基本设备放置、物品与器械贮藏等。 （一）洗涤区（二）灭菌区（三）贮藏区（四）操作液体培养基配制区（一）洗涤区 用于各种实验用具和实验材料的清洗，需要配置专用水龙头、水池、排水系统、洗涤器具、超声波清洗仪、控水架、干燥箱、工作台、蒸馏水器、超纯水仪等，另外应准备适宜的洗涤剂（二）灭菌区 热稳定溶液和耐热器材的高压蒸汽灭菌或干热灭菌工作在灭菌区内进行。 灭菌区需要电炉、高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱（鼓风干燥箱）等设备，用于操作器械、物品、操作液及培养基的灭菌。 物品灭菌后存到无菌贮藏柜或专用无菌贮藏区（三）贮藏区 用于各种试验器皿、培养基、化学药品等的放置。 需要不同规格和类型的贮藏柜，不同制冷温度冰箱（普通冰箱、低温冰箱、超低温冰箱）等设备，用于配制培养基所需要的化学试剂、药品和器皿等的贮藏.（四）操作液体和培养基配制区 操作液体和培养基配制区用于培养基灭菌前试剂的称量、稀释等。二、无菌操作室（一）标准无菌操作室（二）层流净化实验室（一）标准无菌操作室1.缓冲准备区2.操作液体和培养基的无菌配制区3.无菌贮藏区4.无菌操作区5.培养区6.鉴定分析区1.缓冲准备区 用于操作者手臂清洗消毒、更换灭菌衣帽和拖鞋等，以保证其他无菌操作区域的无菌环境。需配备脚踏式水龙头、专用水池、手臂消毒筒及消毒液、鞋帽架、紫外杀菌灯等设备2.操作液体和培养基的无菌配制区 用于将配置好的操作液体和培养基进行无菌处理。 主要配备超净工作台、过滤灭菌装置等，如大量液体配制用的正压（大容量细菌滤器）、负压过，以及少量液体配置用的针头滤器、滤膜等。滤除菌设备（真空泵、抽滤瓶及细菌滤器）及消耗品（滤膜）3.无菌贮藏区 主要用于贮藏灭菌后需在无菌操作区使用的器械物品。 可设置专门的无菌贮藏柜，其好处在于可将无菌操作区不同区域使用的无菌器械物品分开存放，便于随时取用。无菌贮藏区可放置液氮生物容器，以保存培养材料。4.无菌操作区 用于培养物的无菌操作及放置所需仪器设备等，应能长时间保持良好的无菌状态。 需配备隔水式恒温培养箱、恒温水浴锅、操作用显微镜、显微操作系统、细胞电融合电穿孔仪、细胞程序冷冻仪、超净工作台、工作台、酒精灯、紫外线杀菌灯、各种消毒灭菌制剂等，还需配备用于无菌解剖、取材、剪切组织的金属镊（直镍、弯头镊、眼科镊）、剪刀（眼科剪、手术剪等）、解剖刀以及其他无菌操作用器械、器械支架等5.培养区 用于培养物的体外培养、贮存及所需仪器设备的放置。 根据培养工作的不同需要，主要配备二氧化碳培养箱、二氧化碳气体钢瓶（可放置在非无菌区采用管道供气）、恒温培养箱、培养架、暗培养箱、恒温恒湿光照培养箱、培养显微镜（活细胞工作站）、振荡器、离心机、计时器、培养瓶、培养皿、培养板等。培养区环境温度一般要求在25-27℃，故应装备恒温设备6.鉴定分析区 鉴定分析区用于培养物的研究、观察与分析、照相及相应的仪器设备的放置。 主要有相差显微镜、荧光显微镜、倒置显微镜、体式显微镜及配套显微照相系统和图像分析系统、细胞计数仪、细胞分选仪、染色体图像分析系统、离心机、恒温培养箱、液氮生物容器、精密电子天平等等。精密仪器设备应固定安置在台架上。有条件可单设流式细胞仪和酶联免疫检测仪检测室等。※.温室（植物细胞工程）（二）层流净化实验室1. 缓冲准备区12. 缓冲准备区23. 风淋区4. 层流区（操作者液体和培养基的无菌配制区、培养物无菌操作区、培养区及鉴定分析区）。风淋设备层流区请分析这个实验室结构图第二节 细胞工程实验室的基本仪器设备一、常用器皿与器材二、常用仪器设备一、常用器皿与器材（一）培养器皿培养瓶培养皿培养板 （二）盛装器皿（三）计量器皿（四）金属器械（五）其他器材、物品 试管刷、牛皮纸、硫酸纸、锡箔纸、棉绳、纱布、棉布、铝盒、饭盒、消毒架、鞋帽架、紫外线杀菌灯二、常用仪器设备（一）清洗灭菌设备（二）药品试剂存贮和配制设备（三）无菌操作设备（四）培养设备（五）观察分析设备（六）其他仪器设备（一）清洗灭菌设备1.水处理设备金属蒸馏水器超纯水仪2.高压蒸汽灭菌器中型立式灭菌锅卧式高压蒸汽灭菌锅小型手提式灭菌锅日本YAMATO中型立式灭菌器3. 干燥箱4. 过滤除菌装置大型过滤除菌器（二）药品试剂存贮和配制设备 （三）无菌操作设备（四）培养设备培养架人工气候箱CO2培养箱（五