第五章 植物脱毒快繁技术幻灯片.ppt

3、能量竞争。当植物细胞分裂DNA复制时，病毒DNA随着复制。因此，植物细胞分裂和病毒繁殖之间存在相互竞争。在旺盛分裂的分生组织中，代谢活动很高，正常核蛋白合成占优势，使病毒无法进行复制。 4、抑制因子存在。在植物体内存在有一种“病毒钝化系统”（抑制因子假说），在分生组织中的活性最高，因而使分生组织不受侵染。 枫树快繁图示 月季快繁图示 腋芽在生根培养基中生长两周，即可有小的幼根生成，三周后，幼根可长至2 cm长。 将上述月季苗经过炼苗后，从培养基中取出，小心地洗去根上的培养基，然后将其接种在培养介质中(营养土:蛭石:珍珠岩= 3:1:1)，再将培养介质浇透水，用保鲜膜封上，以防止水分的散失，然后将其放在弱光、湿度大的培养室中培养，待长出新根后，可移入田间土壤中。具体过程如下图： 植物快繁的一般程序 1.无菌母体植株的制备： （取材、植物激素、 防止褐化和有害物积累） 2.不定芽增殖 ： （增殖的途径：诱导形成大量胚状体；诱导形成大量不定芽；促进腋芽的快速形成；愈伤组织增殖） 3. 完整植株的形成： 4. 再生植株的驯化 ： 5. 再生植株的鉴定： （植物形态学鉴定；细胞学鉴定） （一）离体繁殖的一般技术 1.外植体的选择 (1)根据培养目的选择 (2)考虑种质、取材大小、时期和材料的生理状态，具有代表性 2．培养物的增殖 　植物的种类和自然生长习性不同，其增殖方式及所采取的相应技术措施也不一样。一般来讲，培养物的增殖有以下4种方式 ①芽增殖特点主要表现在培养方法简单，能高度保持遗传稳定性，能长期继代繁殖。目前采用这一方式快速繁殖的植物有石竹、马铃薯、甘薯、草莓、葡萄和月季等。 ②不定芽增殖 从现存的芽以外的任何器官和组织上通过器官发生重新形成的芽称之为不定芽。 特点主要表现在繁殖系数高，有较好的遗传稳定性。 ③胚状体增殖 特点是增长率高，胚的双极性免去了生根环节，但胚状体休眠的诱导和解除还难以把握，其成苗率还不高。因此，目前除一些特殊用途外(人工种子)，这一技术途径还没有用于植物的快速繁殖。 ④愈伤组织增殖 可以说，所有的植物通过组织培养的方法均可以诱导形成愈伤组织,愈伤组织再进一步分化即可获得小植株。 愈伤组织增殖的特点是成功率高，繁殖系数大，但遗传稳定性较差。 3．生根培养 4．生产用苗的培植 （二）离体繁殖的使用范围 离体繁殖常用于以下几个方面： 某些难以繁殖或繁殖系数很低的植物 某些需要加速繁殖的特殊基因型如名贵花卉、优良资源、果树芽变体和转基因植株等 自然无性繁殖极易感染病毒的植物如马铃薯、甘薯、甘蔗、香蕉、石竹和百合等 有性繁殖变异范围过大而自然条件下又不易无性繁殖的植物 （三）离体繁殖的遗传变异与控制 1．外源生长调节剂对品种典型性的影响 2．继代次数与变异 3．增殖方式的合理选择 2、指示植物检测法： 指示植物又称鉴别寄主，指的是对某种或某些特定病毒非常敏感，而且症状表现十分明显的植物。 通常不同病毒应选用不同的植物。马铃薯病毒常用指示植物有千日红、曼陀罗、豇豆、辣椒等。 分为2种 ①汁液感染法（摩擦接种法） ②嫁接检测法 3、抗血清鉴定法（抗原－抗体反应） 原理：由于病毒是由蛋白质和核酸组成的，是一种较好的抗原。将病毒给动物注射后产生抗体。抗原和抗体结合产生血清反应。抗原：病毒。抗体：是指生物体在外来抗原的刺激下产生的一种免疫球蛋白，主要存在于血清中，含抗体的血清称为抗血清。 4、电子显微镜检查法 直接观察有无病毒存在，并根据病毒的大小、形状和结构等来判断病毒种类。 5、酶联免疫吸附测定法(ELISA) 把抗原-抗体的免疫反应于酶的催化反应相结合而发展起来的一种综合性技术，灵敏度高，特异性强，发展最快应用最广的方法。 原理：采用酶标记的特异抗体指示抗原-抗体的结合，从而检测样品中的抗原定量测定法。 双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下： (1)将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。 (2)加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。 (3)加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。 (4)加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。 五、快速繁殖 茎尖培养得到的脱毒苗不多，用于生产需扩大繁殖。 扩繁方法： 1）组培