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超高效液相色谱―串联质谱法快速测定猪尿液中30种不同种类“瘦肉精”药物残留 　　摘 要 建立了超高效液相色谱.串联质谱快速简单地同时测定猪尿液中30种不同种类“瘦肉精”药物（赛庚啶、可乐定及28种β.受体激动剂类）残留的方法。对液相色谱分离条件、MS/MS检测参数及样品前处理方式进行了优化。试样经5000 r/min离心5 min后直接经MCX柱净化，分别用3 mL水和3 mL甲醇淋洗，5%氨化甲醇进行洗脱，N2吹干后以流动相进行复溶，UPLC.MS/MS进行测定。结果表明，30种药物可在5.0 min内有效分离； 各药物在0.1～10 μg/L范围内呈良好的线性关系，相关系数均大于0.992； 方法的检出限为0.1 μg/L，定量限为0.3 μg/L。在3个浓度水平下的平均回收率为67.6%～103.2%，日内、日间相对标准偏差分别为2.8%～16.8%和2.6%～15.8%。 　　关键词 超高效液相色谱.串联质谱法； 痕量残留； 猪尿液； 瘦肉精 　　1 引 言 　　“瘦肉精”（Lean meat agents）最早是盐酸克伦特罗的俗称，现在泛指一类可以促进动物生长，提高瘦肉率的药物[1]，主要包括盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、苯乙醇胺A、氯丙那林等β.受体激动剂，以及近年来监测发现的赛庚啶、可乐定等具有促进动物生长、提高饲料转化率的化合物[2]。由于上述药物在动物性食品中的极易残留，会对食用者产生系列毒副作用，因此，包括我国在内的许多国家和国际组织已经制定了极其严格的规定。到目前为止，我国已明确禁止在食品动物养殖过程中使用克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、苯乙醇胺A、氯丙那林、多巴胺、班布特罗、齐帕特罗、马布特罗、西马特罗、溴布特罗、福莫特罗/阿福特罗、特布他林、赛庚啶、可乐定共15种具有促进动物生长、提高瘦肉率的药物[1]。 　　近年来，我国加大了对明令禁止的上述15种“瘦肉精”非法使用的打击力度，“瘦肉精”药物在畜禽养殖中的非法使用得到了有效遏制，然而具有促进动物生长、提高瘦肉率功效、而未被列入国家禁用药物名单的β.受体激动剂同系物或衍生物（如克罗潘特、羟甲基克伦特罗、克伦丙罗、西布特罗、妥布特罗、马喷特罗、喷布特罗、卡布特罗、丁酚胺、利托君、克伦己罗、克伦塞罗、异克伦潘特、溴氯特罗、苯氧丙酚胺等）极易被不法分子利用，作为新型“瘦肉精”替代物，用于生猪养殖过程中，达到非法牟利的目的，进而威胁广大消费者的健康安全。 　　尿液常被选择作为药物代谢、残留消除实验的重要靶组织，而且，与其它组织样品相比，尿液在样品采集过程中可有效避免对动物造成损伤，因此，动物尿液通常作为大批量样品监测的测试对象[3]。近年来，研究者针对动物尿液中β.受体激动剂药物残留建立了包括液相色谱[4]、气相色谱.串联质谱[5]、液相色谱.串联质谱[3，6～11]、ELISA[12]、胶体金试纸法[13]、免疫传感器[14]、液相芯片法[15]等一系列快速检测及定量确证检测方法。而赛庚啶、可乐定作为新型“瘦肉精”药物，分别属于H1受体拮抗药和α2.受体激动剂[14，15]，其化学结构与β.受体激动剂药物有较大的差异（各药物的化学结构见图1），理化特性、色谱行为也有较大差别，因而同时检测赛庚啶、可乐定与β.受体激动剂的方法鲜有报道[16]。 　　本研究建立了超高效液相色谱.串联质谱快速、简单地同时测定猪尿液中30种不同种类“瘦肉精”药物（赛庚啶、可乐定及28种β.受体激动剂类）残留的方法，为加强生猪养殖、屠宰过程中违法使用不同种类“瘦肉精”的监管提供了可靠的技术支撑。 　　2 实验部分 　　2.1 仪器与试剂 　　AcquityTM UPLC.Xevo TQ MS超高效液相色谱.串联质谱仪（配电喷雾离子源）、UPLC CSH C 18色谱柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）、BEH C 18（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）、HSS T3（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）、BEH Shield RP 18（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）、固相萃取装置、Oasis MCX固相萃取柱（60 mg， 3 mL）均为美国Waters公司产品； 5804R高速冷冻离心机（德国Eppendorf公司）； 氮吹仪（美国Organomation公司）。 　　标准品： 盐酸克仑特罗（Clenbuterol hydrochloride， 98.5%）、盐酸溴布特罗（Brombuterol hydrochloride， 98.5%）、盐酸班布特罗（Bambuterol hydrochloride， 98.0%）、莱克多巴胺（Ractopamine， 97.0%）、沙丁胺醇（Salbutamol， 100