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发酵工程学科的进展 ——第四次奎国发酵工程学术讨论舍语文集 产对羟基苯乙腈水解酶微生物菌株的鉴定 邢良英，柳志强，郑裕国，沈寅初 (浙扛工业大学生物与环境工程学院，浙江杭州310014) 摘要：丰实验室从土壤中新谛连刘一株能产生对羟基苯乙腈水解酶的微生物菌株E9，能 rD— 专一地把对羟基苯乙腈转化成对羟基苯乙酸，且经过对其形态特征、生理生化指标、16S NA序列测定及其固源性分析。确定该菌株属于枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，暂谛名为 BacillussubtilisE9． 关键词：对羟基苯乙腈}腈水解酶；16SrDNA)枯草芽孢杆菌 对羟基苯乙酸是一种重要的有机合成中间体，其应用领域覆盖医药、农药、液晶材料 等多方面。在医药领域主要用来合成心血管药物-4，7-二羟基异黄酮，还可合成消炎镇痛 药物苯恶洛芬，而由该产品合成的抗生索药物拉氧头孢钠更是疗效显著的医药产品。其 次还用于抗高血压药物一阿替洛尔以及抗癌药物、抗糖尿病药、抗动脉硬化药、抗过敏药 和消炎药、B一受体阻滞药等的台成。在生物化学领域中，合成脂肪氧合酶阻滞剂需用对羟 基苯乙酸。此外还可用于抗静电剂的合成[1]。目前国外已有文献报导能将对羟基苯乙 butanica 腈水解为对羟基苯乙酸的菌株有Rhodococcus fae· calls ATCC JM3”及一lcaligenesfaecalis8750H3三株，但所报导菌的活力都不高，底物 的浓度也较低，未高于lg／L的浓度。所以筛选到一株新的能产腈水解酶的菌株具有较 高的理论意义，所得的菌种也同样蕴藏着潜在的应用价值。本文报道了从土壤中新筛选 到一株能产生对羟基苯乙腈水解酶的微生物菌株E9，并通过其形态特征、生理生化指标、 16S rDNA序列测定及其同源性分析对其进行了鉴定。 1 材料与方法 1．1材料 1．1．1菌株 subtilis 本实验室从土壤中新筛选到的菌株BacillusE9。 1．1．2培养基 0． 斜面保存培养基及平板培养基B(g／L)：葡萄糖10g／L，酵母粉39／L，K2HPq 29／L，KH2PO‘c．29／L，MgSO··7H200．29／L，NaCl lg／L，琼脂209／L，pH自然。 6．69／ L、KH2Pq 0．59／L、MgS010．59／L、FeCh0．Olg／L，pH自然。 1．2方法 1．2．1菌株的形态学与生理生化特征分析 250 第四次全国发酵工程学术讨论台 按《常用细菌系统鉴定手册》[53与微生物实验“03进行培养和生理生化特征的观察。 1．2．216S rDNA的PCR扩增和序列分析 16S rDNA的PCR反应的引物为一对通用引物口1(由上海生工生物工程技术服务有限公 5pL，dNTP(Smmol／L)1pL，正向引物和反向引物各1卜L，模板DNA1pL，Taq酶2．5U (由上海申能博彩生物科技有限公司生产)，重蒸水40pL。反应条件为：94℃预变性5 s，52℃90s．72℃120 rain，循环参数为94℃50 s，重复35个循环后72℃继续延伸lo rain。PCR产物的纯化和测序