基质中衍生化固相微萃取与气相色谱质谱联用测定肺癌患者肺组织中的单糖含量与组成.pdfVIP

2006年11月 第四届海峡两岸分析化学学术会议论文集 湖北·武汉 基质中衍生化．固相微萃取与气相色谱一质谱联用 测定肺癌患者肺组织中的单糖含量与组成 莎2，程冬娥3 察冬梅1,2刘名茗1，曾昭睿”，乐 (1．武汉大学化学与分子科学学院，武汉430072；2．中南民族大学化学与材料科学学院分析化学 国家民委重点实验室，武汉430074；3．武汉钢铁集团第EI医院检验科。武汉430085) 摘要：本文采用硼氢化钠还原、乙酸酐乙酰化将单糖转化为其乙酰化产物，然后采用直接固相 微萃取，建立了一种糖类测定方法，对萃取及衍生化条件进行了优化，结果表明，乙酰化后在溶 液中加入少量的有机溶剂可使固相微萃取的灵敏度显著提高。对6例肺癌患者的癌变和癌周肺组 织经水解、还原和乙酰化后，用固相微萃取对其所得单糖进行了测定，通过比较发现虽然不同患 者的肺组织中单糖的种类和含量存在一定差异，但均含有鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡 萄糖、半乳糖、肌醇、Q一甲基一D一甘露糖苷和Ⅱ一甲基一D一葡萄糖苷，且对于同一患者的癌 变组织和癌周组织来说，鼠李糖、阿拉伯糖和木糖在癌变组织中的含量均有所升高。 关键词：糖；衍生化；固相微萃取；气相色谱一质谱；肺癌：肺组织 糖是生物体中普遍存在的一类重要物质。在生命活动的过程中糖作为能量物质及结构物质的 作用已被人们所熟悉。近来对糖的生物学研究又表明：一切主要的生命活动过程都有糖的参与。 生物体中多糖及其衍生物的糖链作为生命活动过程中主要的生物信息携带者和传递者，调节着细 胞的生长、发育、分化和代谢等过程，并与许多疾病如癌症、细菌和病毒感染等疾病有着密切的 关系。因此糖的测定有着非常重要的意义。糖的测定方法很多，目前最常用的是气相色谱法。由 于糖类极性强、沸点高，不适于直接进行气相色谱分析，需要先通过衍生化将其转化为极性较弱、 沸点较低的物质，以改善其色谱行为，提高检测灵敏度。用于糖的气相色谱分析的衍生化方法很 多，其中糖醇乙酰化由于能够产生较单一的色谱峰，得到了广泛的应用。但由于在进样前多需经 有机溶剂萃取以除去水溶性杂质并对目标组分加以浓缩，操作繁琐费时，且容易造成样品损失。 技术。该技术由于具有分析速度快、操作简便、样品用量少、容易实现自动化、容易与其它分析 仪器联用等优点，且能一步实现样品的采集、浓缩和进样，因此在挥发和半挥发性物质的分析方 面得到了广泛应用。但由于对一些极性较强、沸点较高的物质萃取效率较低，因而限制了它的应 用。通过衍生化技术将这些物质转化为极性较弱、沸点较低的衍生物是提高其萃取效率的一种重 要方法。本文采用在基质中衍生化将糖转化为极性较低的乙酸酯衍生物，通过固相微萃取进行 GC—MS分析了6例肺癌患者的肺组织中的糖，并对萃取等条件进行了优化。 实验结果表明：除萃取温度和萃取时间对各糖的乙酰化衍生物的萃取效率影响较大外，少量 有机溶剂的加入也可显著提高萃取效率，在最佳条件下可使各糖的检出限降低约两个数量级。图 1为有机溶剂CHCl3的加入量对糖的衍生物的峰面积的影响。 对来自6名肺癌患者的癌变和癌周肺组织的分析结果表明：尽管不同患者的肺组织中的糖的 ’通讯联系人 143 2006年1 1月 第四届海峡两岸分析化学学术会议论文集 湖北·武汉 组成和含量存在一定差异，但均含有鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、肌醇、 Q一甲基～D一甘露糖苷和n一甲基一D一葡萄糖苷，并且同一患者的癌变组织与癌周组织相比， 鼠李糖、阿拉伯糖和木糖的含量均有所升高。图2和图3分别为同一患者的癌变和癌周组织经水 解、还原、乙酰化和固相微萃取后所得单糖衍生物的GC—MS分析结果。 2∞E+008 d 1 50E+008 4O∞O 1∞E+006 日∞L日