四种纤维素酶酶活测定方法的比较.pdfVIP

—==116 2oo6。vo1．27．NO．3 食品研究与j：f发 检潮分析 四种纤维素酶酶活测定方法的比较 赵玉萍，杨 娟 (淮阴工学院生物工程与化学工程系，江苏淮阴223001) 摘要：研究和分析滤纸酶活(FPA)~1定方法、羧甲基纤维素钠盐(CMC—Na)酶活性测定方法、染色纤维素测定方法以 厦 CMC粘度降低测定方法，比较了这 4种方法测定的线性相关性以厦稳定性，经过实验研究表明，FPA测定方法和 CMC—Na酶活性测定方法较稳定．线性相关性较高，可以作为研究测定的方法。 关键词：纤维素酶；纤维素酶酶活；测定方法；比较 COMPARISON OF FOUR CELLULASE ACTIVITY MEASUREMENT METHODS ZHA0 Yu—ping．YANG Juan (Department of Bioengineering and Chemical Engineering，Huaiyin Institute of Technology，Huaiyin 223001，Jiangsu，China) Abstract： e Filter Paper Activity(FPA)measurement，the CMC activity measurement，the lower CMC viscosity measurement and the stain cellulose measurement were studied and analyzed in this paper．The linear and stability of these measurement methods were compared．The results showed that the FPA mea— surement and the CMC activity measurement had higher stability and higher linear， and both of them could be cellulase activity measurement method for research． Key words：celulase；cellulase activity；measurement；comparison 对木霉等低等真菌纤维素酶的研究报道很多， 曾报道过的纤维素酶的测定方法也很多，有棉线切 断法，滤纸崩溃法，CMC粘度降低法，染色纤维素 法，平板法，羧甲基纤维素钠盐酶活测定方法，对于 细菌等对纤维素分解能力强的微生物，由于对其酶 的形成、分泌和作用机制研究较少，这些测定方法 不一定适用_l_。但目前对于这些方法测定的具体数 值的可信度、可比性，却没有相关的报道研究。本次 实验对报道较多的4种方法进行实验，研究这些实 验方法的稳定性，从而为实验研究提供一定的参考 依据。 1 材料与方法 1．1材料 1．1．1主要仪器 HH一6型恒温水浴锅；22PC型分光 光度计；HG1001型电热鼓风干燥箱；FA2004型电 子分析天平；UV一2401型紫外双光束分光光度计 1．2实验方法 1．2．1试剂的配制 1．2．1．1 pH 4．6醋酸一醋酸钠缓冲液：l1．8 mL冰醋酸 定容至 100 mL，称取 27．2 g的醋酸钠溶解并定容至 100 mL，将上述两种溶液等体积混合[z-。 1．2．1．2 3，5一二硝基水杨酸溶液(DNS)：称取 3，5一二 硝基水杨酸 6-3 g于 500 mL大烧杯中，用少量蒸馏 水溶解后加入 2 mol／L NaOH溶液 262 mL，再加入 到500 mL含有 185 g酒石酸钾钠的热水溶液中，再 作者简介：赵玉萍(1977一)，女，讲师，硕士研究生 ，研究方向为生物 技术，食品生物技术。 加5 g结晶酚和5 g无水亚硫酸钠搅拌溶解，冷却后 移入 1 000 mL容量瓶中，用蒸馏水定容至 1 000 mL，贮于棕色瓶中，室温放置一周后使用【 。 1．2．1．3 CMC—Na溶液：称取0．625 g羧甲基纤维素 钠，加热溶解，定容至 100mL[4]。 1．2．2酶活测定方法 1．2．2．1葡萄糖标准曲线的绘制 原理：3，5一二硝基水杨酸与还原糖共热后被还 原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内还原糖的 量和反应液的强度成比例关系，利用分光光度计测 出其在520 nm处的吸光度，得出还原糖的量。 葡萄糖标准溶液的配制：将葡萄糖放在 11O℃ 烘箱中烘2 h至恒重，称取0．1080 g烘好的葡糖糖， 溶解并定容至 100 mL。 取 l6支具塞试管，依次编号为0，1，2，3，4，5， 6，7并作平行实验。由于各种方法反应体系的总体 积不同，所以需作不同的标准曲线，所加的量