第三章_高效液相色谱分析幻灯片.pptVIP

第三章 液相色谱法简介;3.1高效液相色谱分析法的特点;二、HPLC与GC差别;2．流动相的区别 GC：流动相为惰性，气体组分与流动相无亲合作用 力，只与固定相有相互作用。 HPLC：流动相为液体，流动相与组分间有亲合作用 力，能提高柱的选择性、改善分离度，对分离起 正向作用。且流动相种类较多，选择余地广，改 变流动相极性和pH值也对分离起到调控作用，当 选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相 也可以增大分离选择性。 3．操作条件差别 GC：加温操作 HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小） ;三、 HPLC的应用  application of HPLC;2. 稠环芳烃的分析;第二节 影响色谱峰扩展及色谱分离的因素;（1）流速：流速大于0.5 cm/s时, H～u曲线是一段斜率不大的直线。降低流速，柱效提高不是很大。但在实际操作中，流量仍是一个调整分离度和出峰时间的重要可选择参数。;(2) 液体的粘度比气体大一百倍,密度为气体的一千倍,故降低传质阻力是LC中提高柱效的主要途径。;1．分离原理：利用组分分子占据固定相表面吸附 活性中心能力的差异 ;2．固定相;1）硅胶： 无定型硅胶 最早使用，传质慢、柱效低 薄壳型硅胶 直径为30~40μm的玻璃珠表面涂布一层1~2μm 厚的硅胶微粒，孔径均一、渗透性好、传质 快，但柱容量有限。 全多孔球型硅胶 粒度一般为5~10μm，颗粒和孔径的均一性都比 前两种好，柱容量大，为当今液固色谱固定相 的主体，也是键合固定相的主要基质。 原理-吸附 特点-峰易拖尾 适用-分离极性化合物;2）高分子多孔小球： 特点：柱选择性好，峰形好，柱效低 适用：分离弱极性化合物;3．流动相 除了最基本的要求之外，主要考虑溶剂强度，溶解度参数及极性参数等。;1．分离原理：利用组分在两相中溶解度的差异 2．固定相：载体+固定液（物理或机械涂渍法）缺 点是固定液层的耐溶剂冲刷性能差，固 定液易流失，从而导致柱效降低，被键 合相填料所取代。 3．正相色谱-固定液极性 流动相极性（NLLC） 极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱， 适于分离极性组分。 反相色谱-固定液极性 流动相极性（RLLC） 极性大的组分先出柱，极性小的组分后出柱适 于分离非极性组分。; 键合相色谱基本上属于分配色谱，与液液分配色谱固定相不同的是“固定液”以化学键的形式与载体结合在一起的。常规化学键合相;三、离子色谱法（IC）; 离子色谱是在20世纪70年代中期发展起来的一中技术，其与离子交换色谱的区别是其采用了特制的、具有极低交换容量的离子交换树脂作为柱填料，并采用淋洗液抑制技术和电导检测器，是测定混合阴离子的有效方法。 ;3. 离子对色谱 离子对色谱是一种分离离子型化合物的特殊分 离模式。 采用非极性固定相分离弱酸或弱碱等可离子化 的物质时，因其在固定相上的保留作用很弱，不易 分离。故在流动相中加一种与被分析物极性相反的 离子（离子对试剂），使其与被分析物形成缔合 物，从而增加保留，提高分离度。;四、排阻色谱色谱size- exclusion chromatography;五、 亲和色谱(AC) Affinity chromatograph;六、分离类型选择 choice of separation types;第四节 高效液相色谱仪器;一、流程（process of HPLC）;二、主要部件（main assembly of HPLC） ;仪器组成;溶剂贮液瓶;高压输液泵;输液泵应具备的性能;输液泵类型;泵的使用与维护;2.脱气装置 流动相溶液往往因溶解有氧气或混入了空气而形成气泡。气泡进入检测器后会在色谱图上出现尖锐的噪音峰。小气泡慢慢聚集后会变成大气泡，大气泡进入流路或色谱柱中会使流动相的流速变慢或出现流速不稳定，致使基线起伏。气泡一旦进入色谱柱,排出这些气泡则很费时间。在荧光检测中,溶解氧还会使荧光淬灭。溶解气体还可能引起某些样品的氧化或使溶液pH值发生变化。; 目前，液相色谱流动相脱气使用较多的是：①离线超声波振荡脱气； ②在线惰性气体（氦气）鼓泡吹扫脱气；③在线真空脱气。;3.梯度洗脱装置 在进行多成分的复杂样品的分离时，经常会碰到前面的一些成分分离不完全，而后面的一些成分分离