双光子激光共焦扫描显微技术在环境化学中的应用及展望.pdfVIP

第 36 卷 2∞8 年 10月 ... 唱，._、国喃喃喃每喧哗喝 过兰兰; 分析化学 (FENXI HUAXUE) 评述与进展 Chin.回eJ剧目咀I of Analytical Ch臼nistry 第 10 期 1447 -1452 双光子激光共焦扫描显微技术在环境化学中的应用及展望 王萍1 朱亚先2 张勇叫 (厦门大学近海海洋环境科学国家Ji:点实撞室.环统科学研究中，以，化学系飞厦门 361∞5) 摘要 介绍了双光子激光共焦扫描61徽技术的基本原、理，评述了该技术与传统荧光E2徽技术和单光子激 光共焦扫描显微技术的异同，并且结合双光子激光共焦担铺盖微技术在实际工作中的应用，评述了其在环绕 化学中的应用潜力及发展搅景。 关键词 双光子激光共焦扫描显微镜，环境化学，评述 直冒!言 环境化学作为化学学科的一个新的重要分支及环境科学的核心组成部分，在推动学科发展和解决 国家重大环境问题等方面发挥着重要的作用。但目前我国环境化学的研究，无论从方法、技术上，还是 研究思路上大多缺乏独创性、系统性和完整性，对热点环境问题的研究远远不能满足国家的需求。在环 绕化学过程研究中对污染物的表征研究较多，但在复合污染的界面反应过程动力学方面，缺乏从分子水 平上研究其动力学机制;在环境分析化学方面，虽然建立和发展了较为完备的常规分析测试方法，但在 污染物的现场、实时检测等方面尚缺少有效的方法和仪器{110 双光子激光共焦扫描显微镜( two-photon laser confocal scanning microscope川LCSM)作为第 3 代显微观测技术的代表，它的出现和应用促进了大 最新兴学科的蓬勃发展。该技术具有成像穿透深、光学三维分辨率高等特点。可在分子水平上，对各种 荧光物质及其组分进行定位、定性和半定量分析，为实时原位观测荧光产率较高的污染物在环境介质中 的行为提供了最佳方法[飞但迄今为止，TPLCSM 技术在环绕化学相关研究领域的应用还较少。 本实 验小组首次利用 TPLCSM 技术研究了多环芳经(PAHs)在典型红树林生态系统中的环境行为。通过研 究 PAHs在典型红树林生态系统的输入、分布、化学赋存形态、迁移转化规律，拟揭示红树林生态系统对 PAHs等有机污染物的控制与修复途径、机理，从而为以 PAHs 为代表的持久性有机污染物在环境中的 迁移转化机翠的研究提供新的证据。本文主要介绍 TPLCSM 技术的发展及其在环境化学中的应用，同 时结合所在研究小级目前在环境化学学科领域开展的相关工作，评述了该技术在环搅化学中的应用潜 力和发展前景。 2 双光子激光共焦扫描显微技术 2.1 TPLCSM 技术简介 荧光显微技术的发展主要经历了从定性到定量，从二续到三维成像，即从传统荧光显微镜( fluores- cence microscope , FM ) l\IJ以单光子激光共焦扫描显微镜(single-photon laserωnfocal 酬Dning mícroscope , SPLCSM)为代表的空间分辨荧光显微技术的发展阶段。 SPLCSM 克服了传统 FM 技术的部分不足，表现 出许多显著的优点。目前. SPLCSM 已被应用到很多研究领域，解决了如污染物在植物结构组织中的定 位，细菌细胞、生物膜成像等以前难以表象的许多问题(l..J。但由于光损害、光降解、光漂白等因素的影 响，以及显微镜本身复杂光学元件的限制，使得 SPLCSM 的特点和潜力没有完全发挥出来，其应用也在 一定程度上受到了限制。 1931 年， G?ppert-Mayer首次发表了双光子激发理论。阁 1 简单地描述了 组阳很.19 收销 :2∞8 -03.18 接受 本文系饲家自然科学基金(No.. 却777(62)肩1罔家自然科学基金(创新研究静体科学基金)(No. 40呈21αJ03 )资助项目 ? E.maiJ: y血削g@ ;unu. edu. cn 1448 分析化学 第 36 卷 单、双光子的激发过程( 6 ) 0 1 961 年 Kaiser 和 Garrell 通过实验验证了该理论(7) 0 1师0 年， Denk 等制造 出了世界上第一台 TPU二SM 并应用于生物学观测(8) 0 1997 年，美同伯乐( Bio-Rad )公司首次制造出了 商业化的 TPLCSM。该仪桥一经问世，就得以广泛应用，在开拓新学科、提升科研水平方面发挥了重大 作用，揭示了许多新现象和新规律{9} 。 激发态 ←一一→ ←一一斗激发态 r一一一寸 γ一一一-一寸 Excited state Z.Z TPLCSM 技术与传统 FM 和 SPLC. ‘ …__ ..J 、 _ . J SM技术的对比 传统 FM 收集的是样品的整体荧光。 该技