重组Lv-SWD蛋白的表达、纯化与细菌结合试验.pdfVIP

第 53卷第 5期 2014年 3月 湖北 农 业科 学 Hubei Agricultural Sciences Vo1．53 No．5 Mar．，2014 重组Lv—SWD蛋白的表达、纯化与细菌结合试验 杜志强．林 涛 (内蒙古科技大学数理与生物工程学院，内蒙古 包头 014010) 摘要：通过重组 一SWD蛋白的表达与纯化 ，进行 多克隆抗体的制备与细菌结合试验，研究凡纳对虾 (Litopeno．el~vannamei)重组SWD蛋白在先天免疫系统中的功能。结果表明。Lv—SWD的预测分子质量为 12．9 ku，实际大小与理论值相符合 。重组 一SWD蛋 白作为抗原制备 的多克隆抗体 ，可以较好地识别蛋 白 质本身。且可以直接结合巨大芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus al~reus)、绿脓 杆菌(Psel~omonos aeruginosa)以及弧茵(Vibrio)4种细茵。 关键词 ：凡纳对虾 (Litopencleus annamei)；SWD抗 茵肽；多克隆抗体制备 ；细茵结合试验 中图分类号：Q786 文献标识码：A 文章编号：0439—8114(2014)05—1189—02 Expression，Purification and Bacteria Binding Test of a Recombinant Lv-SW D Protein DU Zli—qiang．LIN Tao (Colege of Mathematics，Physics and Biological Engineenng，Inner Mongolia University of Science and Technology，Baotou 014010，Inner Mongolia，China) Abstract：The recombinant Lv—SWD protein of Litopenaeus vartnarnei function in innate immunity system was researched through protein recombinant expression，polyclonal antibody preparation， and bacteria binding assay．The results showed that the predicted molecular weight of Lv—SWD was 12．9 ku．and the virtual molecular wei ght was consistent with the predicted value．The polyelonal antibody was prepared by recombinant Lv—SWD protein and could identi~ the protein antigen．The re- combinant Lv-SWD protein could directly bind to Bacilus subtilis，Staphylococcus al~reus ，Pseudomonas acruginosa，and Vibrw． Key words：Litopenaeus fanrtamei；SWD antibacterial peptides；polyclonal antibody preparation；bacteria binding assay 目前．对于抗菌肽分子在先天免疫系统中发挥 作用的机理还不是十分清楚．根据目前的研究结果 来看．抗菌肽分子在发挥抑菌功能的过程中主要存 在两种模式。一种是直接与细菌作用将其瓦解．另 一 种是发挥蛋 白酶活性抑制剂作用来将细菌除 掉[1] 本研究以凡纳对虾(Litopenaeu$vannamei)重 组 Lv—SWD蛋白作为研究对象．通过蛋白质表达纯 化以及多克隆抗体的制备．利用细菌结合试验来研 究 Lv—SWD的细菌结合作用 ．进一步丰富无脊椎动 物先天免疫系统关于抗菌肽的基本理论 1 材料与方法 1．1 材料 表达菌株是含有 pET⋯28a Lv SWD重组子的 大肠杆菌表达菌株 细菌结合试验的目标菌株分别 是 2种革兰氏阳性细菌(金黄色葡萄球菌Staphyfo— C0CC125 aure125、巨大芽孢杆菌 Bacilus subtilis)和 2 种革兰氏阴性细菌 (绿脓杆菌 Pseudomona$aerugi一 加s0和弧菌 Vibrio)。制备多克隆抗体需要的家兔为 包头市花苑小动物市场购买的普通长耳白兔 1．2 方法 1．2．1 目的蛋 白的表 达