PKCα反义核酸提高SMMC7721细胞对化疗药物的敏感性的论文.docVIP

　　PKCα反义核酸提高SMMC7721细胞对化疗药物的敏感性的论文 【摘要】 目的 探讨蛋白激酶c（protein kinase c）反义核酸（antisense oligonucleotides，asodn）联合5fu、hcpt、as2o3三种化疗药物对肝癌smmc7721的体外高效抑制作用。方法 以聚乙烯亚胺（polyethyleneimine，pei）作载体转染pkcα asodn，用mc7721细胞的增殖抑制作用，并分别计算抑制率和ic50。结果 5fu、as2o3、hcpt与peiasodn物联合使用后，其ic50分别降低到3.9μg/ml、2.67μmol/l、1.46μg/ml,化疗药物的敏感性分别提高到单用化疗药物的2.86、1.84和4.01倍。结论 pei介导的pkcα asodn与化疗药物5fu、 as2o3、hcpt联合使用,可提高肝癌细胞对化疗药物的敏感性,通过与化疗药物的相加或协同作用,减少化疗药物的用量。 【关键词】 蛋白激酶c我反义核酸们肝肿瘤 化学治疗 聚乙烯亚胺 原发性肝癌是一种对化疗药物不敏感的恶性肿瘤[1] 。有报道在肝细胞癌变过程???,细胞信号转导异常起到了关键的作用,其中pkcα表达异常与肝癌的发生发展密切相关[2, 3]。反义寡脱氧核苷酸可以通过转录后抑制来抑制肝癌细胞增殖、诱导凋亡，但是细胞摄取率低、易被核酸酶水解，且使用剂量过大，费用昂贵。.阳离子聚合体pei作为asodn载体可以显著提高其转染效率[4]。临床常规抗肿瘤药物虽然抗肿瘤效果肯定，但是其毒副作用大，易产生耐药性，病人耐受差，同样难以起到令人满意的效果[５７]。因此，本实验研究旨在探讨用聚乙烯亚胺作为载体，pkcα asodn联合5fu、hcpt、as2o3等常规抗肿瘤药物作用于肝癌细胞，增强常规化疗药物的抗肿瘤作用，降低用药剂量，从而提高病人的生存时间和生活质量，减轻病人的经济负担。 １ 材料与方法 1.1 细胞培养 人肝癌smmc7721细胞由中山大学生物化学教研室惠赠；用含10%新生牛血清，rpmi1640培养。 1.2 试剂 cck8（cell count kit8）试剂（日本同 仁化学研究所）；新生牛血清（天津tbd广州展晨）；pkcα asodn（北京塞百盛基因技术有限公司）,全硫代修饰,page纯化, -20℃冻存,使用前用无酚红rpmi 1640培养液溶解。pkca antisense：5′gttctcgctggtgagtttca3′。 1.3 l, 每孔100μl, 接种于96孔板,设3 复孔, 培养4h, 待贴壁达40%～50%后,加入药物。设空白对照组、单纯asodn组、单纯化疗药物组、asodn 联合化疗药物组和peiasodn联合化疗药物组,各组pkcα asodn浓度均为0.25μg/ml; pei与pkc质量比为3∶4，见表1～3；培养48h后, 每孔加入cck8试剂10μl, 继续培养1h, 多功能酶标仪(biorad)测定吸光度a450nm (激发波长450nm, 参比波长655nm), 计算增殖抑制率及各组ic50；增殖抑制率＝[a（对照组）－a（实验组）]/a（对照组）×100%；各化疗药增敏倍数＝单纯用药组的ic50/ 联合用药组的ic50。 1.4 统计学方法 所有数据均用±s表示，使用统计软件spss 13.0。 1.5 金正均q值法[8]判断化疗药物与反义核酸联合使用的效果 q = ea + b/(ea + eb  ea ×eb), ea和eb 分别为单用反义核酸和单用化疗药物的抑制率,ea + b为合并用药的抑制率。式中分子代表“实测合并效应”,分母是“期望合并效应”,q 值是两者之比,qlt; 0.85为拮抗,0.85≤qlt; 1.15为相加,q ≥1.15为协同。2 结果 2.1 5fu与peiasodn联合使用效果 单用5fu的ic50为15.64μg/ml;5fu与asodn联合使用,表现为拮抗作用(qlt;0.85), ic50为26.74μg/ml;5fu与peiasodn联合使用,表现为协同作用(q≥1.15), ic50为3.9μg/ml, 增敏倍数为4.01,见表1、 4。 2.2 as2o3与peiasodn 联合使用效果 单用as2o3的ic50为4.93μmol/l; as2o3与asodn 联合使用,表现为拮抗作用(qlt;0.85), ic50为5.33μmol/l; as2o3与peiasodn联合使用,表现为相加作用(0.85≤qlt;1.15), ic50为2.67μmol/l, 增敏倍数为1.84，见表2、 4。 2.3 hcpt与p