衰老对大鼠腰骶髓排尿相关核团5羟色胺转运体表达的影响.docVIP

　　衰老对大鼠腰骶髓排尿相关核团5羟色胺转运体表达的影响 作者：樊平 康云霄 石葛明 王磊 张国梁 李锦 【摘要】 　　目的 观察衰老对大鼠腰骶髓排尿相关核团5羟色胺转运体表达的影响。方法 选取雄性3月龄和24月龄L）、前角运动核（VH）、背外侧核（DLN）、球海绵体肌脊髓核（SNB）和骶副交感核（SPN）SERT免疫反应强度的灰度值。结果 3月龄及24月龄大鼠腰骶髓排尿相关核团均存在SERT免疫阳性纤维及膨体，两组所观察核团未见SERT免疫反应分布方式的改变，但表现SERT免疫反应强度的不同，24月龄组SERT免疫阳性纤维及膨体少于3月龄组大鼠。24月龄组大鼠在脊髓DGC、IML、VH、DLN及SNB的SERT免疫反应强度灰度值明显高于3月龄组(P＜0.05)。结论 老年大鼠腰骶髓排尿相关核团SERT免疫反应强度的减弱提示5羟色胺能神经纤维对这些核团支配随衰老而减少。 【关键词】 5羟色胺转运体；衰老；排尿；大鼠 　　研究显示，老年人多有排尿障碍，随着衰老而出现尿频、尿不尽等症状〔1〕，老年大鼠也有类似的排尿障碍〔2〕，这可能与排尿的神经调节或排尿器官的衰老性改变有关。脊髓参与排尿控制的传出核团位于腰骶膨大处，这些排尿相关核团接受许多下行纤维的支配，其中5羟色胺(5HT)能神经纤维的信息传递在排尿控制中起着十分重要的作用〔3～6〕。腰骶髓排尿相关核团5HT能神经体系是否随衰老出现表达降低尚不清楚。本研究利用免疫组织化学方法分析老年大鼠腰骶髓排尿相关核团5HT神经体系特异性标记物5羟色胺转运体（serotonin transporter，SERT）免疫阳性纤维和膨体分布及反应强度的变化，探讨老年排尿障碍的神经作用机制。 　 　1 材料与方法 　　1.1 动物 　　选取3月龄和24月龄健康雄性1850恒冷箱冷冻切片机（德国LEica公司产品），HPIAS1000 高清晰度彩色病理图文分析系统（武汉长海科技有限责任公司产品）；多克隆兔抗SERT抗体购自美国ImmunoStar公司，山羊抗兔生物素化二抗及链霉亲和素过氧化物酶复合物购自北京中杉金桥生物技术有限公司。 　　1.3 免疫组织化学及图像分析 　　所有大鼠于深麻醉下以4%多聚甲醛常规经心灌注固定，取第1、第2腰髓节段（L1～L2）和第6腰髓到第1骶髓（L6～S1）节段后固定4 h，加入30%蔗糖溶液4 ℃过夜。将所取部位横断面冷冻切片（40 μm）、间断集片，经PBS洗片后行SABC免疫组织化学显色。步骤：正常血清室温孵育切片30 min、1∶2 000多克隆SERT抗体4℃孵育48 h、1∶500生物素化二抗室温孵育2 h、1∶500链霉亲和素过氧化物酶复合物室温孵育1 h、DAB显色5 min；常规梯度脱水、透明、封片。阴性对照实验以PBS替代一抗。切片以HPIAS1000彩色病理图文分析系统测量各月龄组大鼠灰质后连合（dorsal grey missure，DGC）、中间外侧核（intermediolateral nucleus，IML）、前角运动核（VH）、背外侧核（dorsal lateral nucleus，DLN）、球海绵体肌脊髓核（spinal nucleus of the bulbocavernosus，SNB）和骶副交感核（sacral parasympathetic nucleus，SPN）SERT免疫反应强度的灰度值。 　　1.4 统计学方法 　　数据以x±s表示，经方差齐性检验后行成组设计的t检验。 　 　2 结 果 　　2.1 各组大鼠腰骶髓排尿相关核团SERT免疫组化 　　脊髓腰骶部排尿相关核团含有较丰富的SERT免疫阳性纤维及膨体，点状的免疫反应膨体分布于核团神经元胞体周围。两组大鼠核团SERT免疫阳性纤维和膨体的分布方式未见明显区别，但免疫反应强度在两组存在显著差异，24月龄组SERT免疫阳性纤维及膨体在DGC、IML、VH、DLN和SNB少于3月龄组。见图1。 　　2.2 衰老对大鼠腰骶髓排尿相关核团SERT免疫反应强度的影响 　　与3月龄组比较，24月龄组所观察的部分核团SERT免疫反应阳性纤维和膨体的灰度值显著增加；在DGC升高了13.3%；IML、VH、DLN和SNB分别升高了10.7%、8.3%、12.4%和5%。两组SPN处SERT免疫反应阳性纤维和膨体的灰度值无显著差异，仅存在升高的趋势。见表1。表1 衰老对大鼠腰骶髓排尿相关核团SERT免疫反应强度的影响(略) 　　3 讨 论 SERT是位于5HT能神经末梢的一种膜蛋白，从突触间隙中重摄取5HT入突触前末梢，从而调节5HT的作用强度和时间，其表达变化直接影响5HT能神经元参与的神经活动。研究表明，SERT比5HT更能