基于布鲁氏菌omp25基因的环介导等温技术建立及初步应用.pdfVIP

第 32 卷第6 期 石河子大学学报(自然科学版) Vo 1.32 No.6 2014 年 12 月 Joumal of Shihezi University(Natural Science) Dec.2014 文章编号:1007-7383(2014)06-0683-04 基于布鲁氏菌。mp25 基因的环介导等温技术建立 及初步应用 马国瑞 1 ，李志强 2 ，张辉 2 ，王远志 3 ，陈创夫 1 ，2 (1 石河子大学生命科学学院，石河子 832003;2 石河子大学动物科技学院，石河子 832∞3;3 石河子大学医学院，石河子 823ω3) 摘要:为了建立布鲁氏菌环介导等温技术(LAMP) ，并应用于基层布病诊断，本实验针对布鲁氏菌外膜蛋白基因 Omp25 区域设计 6 条引物，用 SYBR Green 1 染料做指示剂，65 c反应 60 min , 85 c 5 min 终止，根据 SYBR Green 1 颜色变化判定结果，用普通 PCR 验证 LAMP 检测技术的灵敏度和准确性，并对临床疑似布病病料进行检测 验证其临床检测意义。结果显示:LAMP 检测的灵敏度为 4.2 ff!) μL 布鲁氏菌基因组 DNA ，比普通 PCR 高 100 倍左 右;其特异性较好，能够准确检测布鲁氏菌，琼脂糖凝胶电泳显示阳性结果均为梯形条带，而大肠杆菌、卡介苗、金 黄色葡萄球菌、李氏杆菌等均为阴性;对新疆 4 个地区 25 份绵羊流产胎儿病料进行 LAMP 和普通 PCR 方法平行检 测，其符合率为 100% 。结论:LAMP 检测技术用于布病临床诊断具有快速、高效、便捷等特点，为基层布病的病原学 诊断具有潜在的实用价值。 关键词:环介导等温扩增(LAMP) ;布鲁氏菌;快速检测 中图分类号: S85; R378.5 文献标志码:A Establishment and Application of Loop-Mediated Isothermal Amplification for Rapid Detection of Brucella 1 3 1 MA Guorui , LI Zhiqiani ,ZHANG Hu? , WANG Yuanzhi , CHEN Chuangfu ,2 (1 College of Animal Science and Technology,Shihezi University ,Shihezi 832oo3 ,China; 2 College of Animal Science and Technology,Shihezi 832003 ,China; 3 College of Medicine,Shihezi University ,Shihezi 832003,China) Abstract:The aim of this research is to set up a protocol of loop-mediated isothermal amplification 住AMP) and apply it to the grass-roots level detection of Brucella.six pairs of primers specific to the region of Omp25 gene were designed.币le experiment reaction was performed in a single tube at 65 c for 60 min with the addition of