诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的实验研究.docVIP

　　诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的实验研究 作者：郭茂娟 姜希娟 马东明 范英昌 【摘要】 目的 观察乳鼠心肌细胞条件培养液、SalB 、5氮胞苷（5aza）及SalB联合5aza体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的作用及其机制。方法 分离培养及鉴定大鼠MSCs，培养乳鼠心肌细胞，收集条件培养液对其进行分组诱导：①SalB(终浓度为250 μg/L)，②5aza组(终浓度为10 μg/L)，③SalB联合5aza组(终浓度分别为250 μg/L与10 μmol/L)，④乳鼠心肌细胞条件培养液，⑤未加诱导剂的阴性对照组。选取MSCs进行诱导，诱导周期为4 RNA的相对表达量。结果 细胞形态学显示，诱导后的MSCs体积增大，增殖减慢，并出现肌管样结构；免疫细胞化学结果显示，诱导后的MSCs表达心肌特异性蛋白cTnT，与5aza组相比，SalB组和条件培养液两组蛋白表达较低，SalB联合5aza组蛋白表达升高；实时荧光定量RTPCR结果显示除阴性对照组外，其他四组表达心肌分化早期基因，SalB联合5aza组诱导后的MSCs的心肌早期分化基因表达明显高于其他三组。结论 SalB联合5aza诱导MSCs表达心肌特异性肌钙蛋白cTnT；上调心肌早期基因NKX2.5、GATA4mRNA的表达,证实其能够向心肌细胞分化能力；条件培养液不能上调心肌细胞的早期基因和蛋白，不能诱导其分化。 【关键词】 骨髓间充质干细胞；诱导分化；丹酚酸B；5氮胞苷 　　【Abstract】 Objective To explore the role and mechanism of bone marroesenchymal stem cells (MSCs) differentiated into myocardial cells induced by neonatal rat myocardial cells conditioned medium, salvianolic acid B (SalB), and SalB bined yocardial cells inal concentration 250 μg/L), 5azacytidine (5aza) (250 μg/L), SalB bined ol/L), Neonatal rat myocardial cells condition culture fluid, and orphologic change icroscope, cTnT expression mnocytohistochemical assay, and myocardial early gene NKX2.5, and GATA 4 mRNA expression orphologic observation: after inducing, MSCs volume enlarged, proliferation speed sloyotube. ②Expression of cTnT: cTnT yocardial early gene: myocardial early gene easured in other 4 groups except negative control group, and yocardial specific troponin (cTnT), upregulate early gene NKX2.5 and GATA 4 mRNA, MSCs can differentiate into myocardial cells and condition culture fluid can′t upregulate the expressions of myocardial early gene and protEin, and induce MSCs differentiation. 　　【Key esenchymal stem cells; Induced and differentiated; Salvianolic acid B; 5azacytidine 　　骨髓间充质干细胞(MSCs)系自体来源,取材容易,扩增能力强,是一种体内外均有极强的分化潜能的干细胞〔1〕。SCs体外可被5aza诱导分化为心肌样细胞。但5氮胞苷(5aza)作为抗肿瘤药物具有一定的毒副作用，故寻找安全、有效的诱导剂应是目前的重要课题。以往的研究结果表明SalB可以减小心肌梗死的面积〔3〕，并能有效地促进梗死灶内成纤维细胞的增生，加速心脏的修复过程。本研究运用乳鼠心肌细胞条件培养液、SalB、5aza以及SalB联合5aza体外