第八章发酵工程----.pptVIP

第二节：下游加工过程 1、发酵液的预处理、固液分离和细胞破碎 2、初步纯化 3、高度纯化 4、成品加工和发酵废液排放 * 第二节：下游加工过程 一般说来，下游加工过程可分为4 个阶段： ① 培养液的预处理和固液分离； ② 初步纯化（提取）； ③ 高度纯化（精制）； ④ 成品加工。 * 第二节：下游加工过程 一般工艺过程: * 1、发酵液的预处理、固液分离和细胞破碎 在活性物质稳定性的范围内，通过酸化、加热、以降低发 酵液的粘度。另一种有效的方法是加入絮凝剂，使细胞或 溶解的大分子聚结成较大的颗粒。 固液分离： * 细胞破碎的方法有机械法、生物法、和化学法等。大规模生 产中常用高压匀浆器和球磨机。前者主要利用液相剪切力和 与固定表面撞击所产生的应力，后者主要依靠研磨，两者机 理不同，可以互为补充。 1、发酵液的预处理、固液分离和细胞破碎 细胞破碎： * 2、初步纯化 经固液分离或细胞破碎及碎片分离后，活性物质存在于滤液 器中，滤液体积很大，浓度很低，下游加工过程就是浓缩和 纯化的过程，常需要好几步操作。其中第一步最为重要，称 为初步纯化或提取，主要目的在于浓缩，也有一些纯化作用， 而以后几步操作所处理的体积小，合称为高度纯化或精制。 * ① 吸附法：主要用于抗生素等小分子物质的提取，系利用 吸附剂与抗生素之间的分子引力而将抗生素吸附在吸附 剂上。 2、初步纯化 ② 离子交换法：主要用于小分子的提取。离子交换法系利 用离子交换树脂和生物物质之间的化学亲和力，有选择 性地将生物物质吸附上去，然后以较少量的洗脱剂将它 洗下来。 * 2、初步纯化 ③ 沉淀法：广泛用于蛋白质的提取。它主要起浓缩作用， 而纯化的效果较差。本法又可分为下列5种类型。 ⑴盐析：加入高浓度的盐使蛋白质沉淀。 ⑵加入有机溶剂：其机理为加入有机溶剂使溶液的介电 常数降低，从而使水分子的溶解能力降低。 ⑶调pH至等电点：此法沉淀能力不强，常同时加入有机 溶剂，使沉淀完全。 ⑷加入非离子型聚合物：如PEG，其机理与盐析作用相 似。 * 2、初步纯化 ④萃取法：萃取法是利用产品在互补相溶的二相溶剂中有 不同的溶解度来进行的 。 ⑴ 溶剂萃取法。由于蛋白质遇有机溶剂会引起变性，故 该法一般用于抗生素等小分子的生物物质的提取。 ⑵ 两水相萃取法。此法适用于蛋白质的提取，近年来也 开始研究用于小分子物质。由于聚合物分子的不相溶性， 两种聚合物的水溶液（含盐与不含盐）可以分成两相。 蛋白质分子可以在两相间进行分配。目前已成功应用在 酶的提取中。 * ⑶ 超临界流体萃取。超临界流体的密度和液体相近，溶 质在其中的扩散速度可为液体的1000倍，这是超临界 流体的萃取能力和萃取速度优于一般溶剂的原因。 ⑷ 逆胶束萃取。将水溶液与有机溶剂和表面活性剂混合，并加以搅拌，如系统选择适当，则会形成逆胶束。表面活性剂处在逆胶束表面，极性端指向胶束内部，而非极性端指向胶束外面，形成含逆胶束的有机相与水相成平衡。蛋白质就在这种有机相与水相之间进行分配。 2、初步纯化 * ⑤ 膜过滤法：又分为超滤，微滤，反渗透和纳滤四种。超 滤法是利用一定截留分子量的超滤膜进行溶质的分离或浓 缩。微滤主要用于发酵液中除去菌体；反渗透主要用于小 分子的浓缩；纳滤也可用于小分子的浓缩。膜过滤的主要 缺点是浓差极化和膜的污染，膜的寿命较短和通量低，很 难用于处理量大的工业中。但这些缺点正在克服，有很好 的发展前景。 2、初步纯化 * 3、高度纯化 高度纯化（精制） 1 色谱分离：色谱分离是一种高效的分离技术，过去仅 用于实验室中，后来规模逐渐扩大而应用与工业上。操作 是在柱中进行的，包含两个相——固定相和流动相，物质 在两相间分配的情况不同，在柱中流动的速度也不同，而 获得分离。 2 结晶：结晶可以认为是沉淀的一种特殊情况。结晶 的先决条件是溶液要达到过饱和。要达到过饱和可用下列 方法： ①加入某些物质，使溶液平衡发生改变，如调pH； ②将溶液冷却或将容易蒸发 * 发酵液经提取和精制后，还应视实际需要进行浓缩、干燥、 除菌等处理，以达到产品的应用要求。 4、成品加工和发酵废液排放 * 单元操作 分离机理 分离对象举例 膜分离 微滤 超滤 反渗透 透析 电渗析 渗透气 压力差、筛分 压力差、筛分 压力差、筛分 浓度差、筛分 电荷、筛分 汽液相平衡、筛分 菌体、细胞 蛋白质、多糖、