脂肪酶作用原理与应.pptVIP

脂肪酶在生物柴油中的应用 生物柴油是碳链长度为16-19的脂肪酸和甲醇或乙醇形成的酯类化合物的总称。近年，用脂肪酶催化合成生物柴油，代替石化能源成为研究热点。 * 用物理吸附法将假丝酵母脂肪酶(Candida sp．99—125)固定于大孔树脂，可催化大豆油制造生物柴油。研究表明，粗酶，树脂重量比为1．92：1，水，油重量比为3：17，4O℃，pH 7．4时，脂肪酶活性较高，转化率9 7．3％。用固定化南极假丝酵母(c．antarctica)脂肪酶催化泔水油，可制造生物柴油。 * 脂肪酶在生物传感器中的应用 用脂肪酶的催化特性研制生物传感器逐渐受到关注。固定在pH或氧化电极的脂肪酶联合葡萄糖氧化酶可作为脂质生物传感器，测定甘油三酯、血胆固醇含量。 * 前景与展望 脂肪酶来源不同，导致结构和性质的多样性、不稳定性，使脂肪酶研究进展较慢。固定化脂肪酶可重复利用，提高酶稳定性、有利于实现工业化生产，降低生产成本。目前，脂肪酶固定化因其经济性和技术可靠性，离产业化还有相当大的差距，需对脂肪酶载体、固定化技术作深入研究。 * 今后，脂肪酶研究需生物遗传、生物化工、仪器分析、食品工程等领域的研究人员通力合作， 筛选新的工业脂肪酶菌株，以解决工业生产和保护环境问题。 现在有很多商品化的脂肪酶产品，多数是通过微生物发酵制得，只有少数几种来源于动物的脂肪酶是通过从动物体中提取的方法制备。 * 根据不同用途开发出不同特性的脂肪酶产品，而这些已实现商品化生产的脂肪酶产品其pH稳定性多在中性偏碱范围内，对酸的耐受性较差(Claudia)，而添加于饲料中的脂肪酶必须要经过胃肠道的酸性条件及内源酶的水解到达作用位点，并能够在作用位点的pH范围内具有较高的活性，因此绝大多数已实现商品化生产的脂肪酶并不适合于饲料用。 * 基于这种现状，对脂肪酶研究进行一些探索性的工作，从而推动脂肪酶在饲料工业中的应用，也是一件非常有意义的工作 。 * * * * * * * * 溴甲酚紫平板筛选法： 筛选原理：溴甲酚紫作为一种显色剂，其PH变色为5.2-6.8，在碱性条件下显紫色，在酸性条件下鲜黄色，只放在脂肪酶的催化作用下生成的脂肪酸会使培养基的PH降低，产脂肪酶菌株的周围会出现先黄色的透明圈，根据透明圈的有无和大小来筛选产脂肪酶的菌株，透明圈越大说明产脂肪酶活力越强。 * 琼脂块培养法： 将分离培养基用灭菌的打孔器制作成许多单个的直径约0.6cm的小琼脂块，排放在干净的培养皿内，将套选的菌株接种在这些小琼脂块上培养，让其充分生长。 * 然后依次再将长满菌的小琼脂块放到酶活测定板上，28℃培养1-3d，观察各菌落周围油脂水解圈的大小，水解菌越大，酶活越强，将水解圈大的菌株纯化后保存在斜面培养基上。 * 复筛选方法——摇瓶培养 种子培养基→发酵培养基→收集菌体和上清液，分别测酶活。 酶活的测定： 在给定的时间内，脂肪酶酶活大小与其催化水解生成的脂肪酸的量成正比。脂肪酶酶活的测定方法很所，根据原理不同，其中酸碱滴定法和分光光度法最为常用，常用的分光光度法有铜皂显色法和对硝基苯酯法。 * 测定脂肪酶酶活常用方法的比较 * * 脂肪酶的特性，结构和催化作用原理 脂肪酶的M 脂肪酶的M因其来源不同而差异很大，不同来源的脂肪酶，其氨基酸组成数目从270-641不等，其M从29-100kD变化。 * 脂肪酶的最适温度和最适PH 脂肪酶的最适温度一般在30-60℃之间，最适PH一般为6-10，不同来源的脂肪酶的最适合的温度和最适合的PH差异也比较大。列入一株无花果假丝酵母的脂肪酶最适温度为42℃，最适PH为8.0，一株青霉突变株的最适温度为25℃，最适PH为10 * 脂肪酶的界面活化机理 脂肪酶和酯酶都能催化酯的水解，但只有脂肪酶可以催化水不溶性酯的水解。脂肪酶和酯酶的最大差别在于他们与底物的作用形式不同。酯酶的活性随着底物浓度的增加而增大，变现为依赖于底物浓度的正常Michaelis-Menten活性，而脂肪酶则表现出C形曲线， * 在底物浓度处于溶解状态下，脂肪酶几乎没有活性，只有当底物浓度逐渐增加到超出其溶解度极限时，才表现出明显增加的活性，这种现象称为“界面活性”。 * * 脂肪酶的类型和生理分布情况 大多数脂肪酶的行动特定位置上的脂至底物（小肠）甘油骨干。列入，人体胰腺酶。只是主要的酶，能分解人体消化系统中的膳食脂肪。转换成单甘酶和两种脂肪酶的摄入由衷的甘油三脂基板。其他及中国类型那个的脂肪酶的活性存在于自然中 如磷脂和鞘磷脂，然而，这些通常是从 传统的脂肪酶 分别对待。 * 在干按预案微生物分泌的一些脂肪酶的表达。尤其是白色念珠菌永远的大量不同的脂肪，这可能反映了广泛的脂肪分解活性，这可能有助于人体组织的持久性拜念珠菌的毒理。 * 生理分布脂肪酶在不同的生物