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干热灭菌法
农艺学院黄艳青 一、玻璃器皿的清洗 1.新购的玻璃器皿 碱性玻璃浸泡于1mol/L盐酸浸泡过夜,中和玻璃中的碱性物质。 2.用过的玻璃器皿 污染的器皿,必须经过适当消毒, 污迹不能洗净时,可浸泡于洗液内。 3.洗液的配制 称取重铬酸钾100g与1000mL水置大烧瓶中加热搅拌溶化,待冷却后,将烧瓶置冷水中,慢慢加入浓流酸250mL,并不断搅拌。 二、消毒、灭菌 消毒(disinfection):杀灭物体上病原微生物的方法,但不一定杀死细菌芽胞。 灭菌(sterilization):杀灭物体上包括芽胞在内的所有病原性和非病原性微生物的方法。 防腐(antisepsis):防止或抑制细菌生长繁殖的方法,细菌一般不死亡。 无菌(asepsis):不含活菌的意思。防止微生物进入机体或物体的操作方法,称为无菌操作或无菌技术。进行微生物实验、外科手术及医疗技术操作等过程,均需进行严格的无菌操作。 消毒灭菌的方法 (一)物理消毒灭菌法 (二)化学消毒法 (一)物理消毒灭菌法 1.热力灭菌法 热力灭菌法分干热灭菌和湿热灭菌两大类。在同一温度下, 后者效力比前者为大,这是因为: (1)湿热中细菌菌体蛋白较易凝固; (2)湿热的穿透力比干热大; (3)湿热的蒸汽有潜热存在。水由气态变为液态时释放出的潜热,可迅速提高被灭菌物体的温度。 加热灭菌和加热消毒的方法 干热灭菌法 火焰灭菌法 干燥加热空气灭菌法 高温灭菌 巴氏消毒法 常压下 煮沸消毒法 湿热灭菌法 间歇灭菌法 常规加压灭菌法 加压下 (高压蒸汽灭菌法) 连续加压灭菌法 干热灭菌法 1.焚烧:是一种彻底的灭菌方法,但仅适用于废弃物品或尸体等。 2.烧灼:直接用火焰灭菌,适用于微生物学实验室的接种环、试管口等的灭菌。 3.干烤:鼓风干燥箱灭菌。一般加热至160℃~170℃经2小时。适用于高温下不变质、不蒸发的物品, 如玻璃器皿、瓷器等。 湿热灭菌法 1.煮沸法:1个大气压下,煮沸的水温为100℃,一般细菌繁殖体煮沸5~10分钟即被杀死。细菌芽胞常需煮沸1~2小时,才被杀死。水中加入2%碳酸钠,可提高沸点达105℃,促进细菌芽胞的杀灭。 2.巴氏消毒法(pasteurization):用较低温度杀灭液体中的病原菌、同时又不影响消毒物品的营养成分及香味的消毒方法。加热61.1~62.8℃半小时即可,常用于牛奶和酒类等的消毒。 3. 间歇灭菌法(郭霍氏蒸汽消毒):将待灭菌的物品100℃加热15~30分钟,杀死其中的细菌繁殖体,然后将物品置于37℃温箱中过夜使芽胞发育成繁殖体,次日再通过流通蒸汽加热,如此连续三次,可将所有细菌繁殖体和芽胞全部杀死。针对有点培养基和牛奶、糖等在100℃以上有效成分易被破坏的产品进行灭菌。 4.高压蒸汽灭菌法:是灭菌效果最好、目前应用最广的灭菌方法。方法是在一密闭蒸锅—高压蒸汽灭菌器内进行的。通常采用纯饱和蒸汽压为103.4kPa,温度达121℃,维持15~30分钟,可杀死包括细菌芽胞在内的所有微生物。 适用于各种耐热、体积大的培养基的灭菌,也适用于玻璃器皿、工作服、耐高温塑料用品等物品的灭菌。 1.在高压蒸汽灭菌前要确保高压锅中的所有冷空气已经排空,否则表上的蒸汽压与蒸汽温度之间不具对应关系,这样会大大降低灭菌效果。 2.定期对灭菌效果进行监测和验证,可采用: 物理监测法(留点温度计法、热电偶法); 化学指示剂法(化学指示胶带、指示卡等); 生物指示法(孢子悬液、孢子条带等)监控高压灭菌的效果。 辐射 利用辐射进行灭菌消毒,可以避免高温灭菌或化学药剂消毒的缺点,所以应用越来越广 。 1.紫外线:紫外线波长为200~300nm时具有杀菌作用,其中以260nm最强。紫外线杀菌机理主要是作用于细菌DNA,使同一条DN
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