干热灭菌法.ppt

农艺学院黄艳青 一、玻璃器皿的清洗 1.新购的玻璃器皿 碱性玻璃浸泡于１mol/L盐酸浸泡过夜，中和玻璃中的碱性物质。 2.用过的玻璃器皿 　　污染的器皿，必须经过适当消毒， 　　污迹不能洗净时，可浸泡于洗液内。 3.洗液的配制 　　　称取重铬酸钾100g与1000mL水置大烧瓶中加热搅拌溶化，待冷却后，将烧瓶置冷水中，慢慢加入浓流酸250mL，并不断搅拌。 二、消毒、灭菌 消毒（disinfection）：杀灭物体上病原微生物的方法，但不一定杀死细菌芽胞。 灭菌（sterilization）：杀灭物体上包括芽胞在内的所有病原性和非病原性微生物的方法。 防腐（antisepsis）：防止或抑制细菌生长繁殖的方法，细菌一般不死亡。 无菌（asepsis）：不含活菌的意思。防止微生物进入机体或物体的操作方法，称为无菌操作或无菌技术。进行微生物实验、外科手术及医疗技术操作等过程，均需进行严格的无菌操作。 消毒灭菌的方法 （一）物理消毒灭菌法 （二）化学消毒法 （一）物理消毒灭菌法 1.热力灭菌法 　　　热力灭菌法分干热灭菌和湿热灭菌两大类。在同一温度下， 后者效力比前者为大，这是因为： （1）湿热中细菌菌体蛋白较易凝固； （2）湿热的穿透力比干热大； （3）湿热的蒸汽有潜热存在。水由气态变为液态时释放出的潜热，可迅速提高被灭菌物体的温度。 加热灭菌和加热消毒的方法 干热灭菌法 火焰灭菌法 干燥加热空气灭菌法 高温灭菌 巴氏消毒法 常压下 煮沸消毒法 湿热灭菌法 间歇灭菌法 常规加压灭菌法 加压下 (高压蒸汽灭菌法) 连续加压灭菌法 干热灭菌法 1.焚烧：是一种彻底的灭菌方法，但仅适用于废弃物品或尸体等。 2.烧灼：直接用火焰灭菌，适用于微生物学实验室的接种环、试管口等的灭菌。 3.干烤：鼓风干燥箱灭菌。一般加热至160℃～170℃经2小时。适用于高温下不变质、不蒸发的物品， 如玻璃器皿、瓷器等。 湿热灭菌法 1.煮沸法：1个大气压下，煮沸的水温为100℃，一般细菌繁殖体煮沸5～10分钟即被杀死。细菌芽胞常需煮沸1～２小时，才被杀死。水中加入2%碳酸钠，可提高沸点达105℃，促进细菌芽胞的杀灭。 2.巴氏消毒法（pasteurization）:用较低温度杀灭液体中的病原菌、同时又不影响消毒物品的营养成分及香味的消毒方法。加热61.1～62.8℃半小时即可，常用于牛奶和酒类等的消毒。 3. 间歇灭菌法（郭霍氏蒸汽消毒）:将待灭菌的物品100℃加热15～30分钟，杀死其中的细菌繁殖体，然后将物品置于37℃温箱中过夜使芽胞发育成繁殖体，次日再通过流通蒸汽加热，如此连续三次，可将所有细菌繁殖体和芽胞全部杀死。针对有点培养基和牛奶、糖等在100℃以上有效成分易被破坏的产品进行灭菌。 4.高压蒸汽灭菌法：是灭菌效果最好、目前应用最广的灭菌方法。方法是在一密闭蒸锅—高压蒸汽灭菌器内进行的。通常采用纯饱和蒸汽压为103.4kPa，温度达121℃,维持15～30分钟，可杀死包括细菌芽胞在内的所有微生物。 适用于各种耐热、体积大的培养基的灭菌，也适用于玻璃器皿、工作服、耐高温塑料用品等物品的灭菌。 1.在高压蒸汽灭菌前要确保高压锅中的所有冷空气已经排空，否则表上的蒸汽压与蒸汽温度之间不具对应关系，这样会大大降低灭菌效果。 2.定期对灭菌效果进行监测和验证，可采用： 物理监测法（留点温度计法、热电偶法）； 化学指示剂法（化学指示胶带、指示卡等）； 生物指示法（孢子悬液、孢子条带等）监控高压灭菌的效果。 辐射 利用辐射进行灭菌消毒，可以避免高温灭菌或化学药剂消毒的缺点，所以应用越来越广 。 1.紫外线：紫外线波长为200～300nm时具有杀菌作用，其中以260nm最强。紫外线杀菌机理主要是作用于细菌DNA，使同一条DN