运脾和络方对糖尿病大鼠坐骨神经的保护及机制研究.pdf

浙江中医杂志2017年3月第52卷第3期 运脾和络方对糖尿病大鼠坐骨神经的保护及机制研究 杨 欢 王东军 翁思颖 柴可夫 浙江中医药大学 浙江 杭州 310053 关键词 运脾和络方 糖尿病周围神经病变 Caspase-3 氧化应激 大鼠 糖尿病神经病变 (DPN)是糖尿病最为常见的并发症 UC；透射电镜：日立H一7650牌。 之一 ，不仅缩短患者的预期寿命 ，增加其病残发生率，而 2 方法 且给患者本人、家庭乃至社会带来巨大的痛苦与沉重的 2．1 动物模型建立 ：SPF级sD大鼠60只，体质量均在 负担。目前除常规治疗尚无特效药物问世，而中医药对 200g左右 ，适应性喂养 1周后 ，按照完全随机原则对其 DPN的治疗已积累了丰富经验 ，疗效确切 ，而作用机制 进行分组 ，正常组8只，造模组52只。造模组大鼠禁食不 却亟待阐明。本课题组前期研究表明，运脾和络方 (专利 禁水 12h，一次性腹腔注射 1％STZ3Omg／kg(STZ临用前配 申请号：ZL200710156412．4)可上调糖尿病大鼠坐骨神 制 ，溶于0．1mmol／L、pH=4．5的无菌柠檬酸缓冲液 ，避光 经髓鞘碱性蛋白、脑源性神经营养因子的表达 ，从而修 保存 ，30min内使用)，正常组腹腔注射等量的柠檬酸钠 复受损神经 。此实验研究旨在通过探讨运脾和络方对 缓冲液，造模组给予高脂高糖饲料喂养，正常组予普通 糖尿病大鼠坐骨神经细胞Caspase一3表达 、血清GSH- 饲料喂养 。72h后尾静脉取血 ，测血糖i16．7mmol／L，即 PX、SOD活性及MDA含量的影响，探讨其治疗糖尿病周围 为造模成功。 神经病变的可能机制。现将研究结果报告如下。 2．2 分组与给药：按条件选取造模成功大鼠40只，随 l 材料 机分为模型组 、运脾和络方高、中、低剂量组 、甲钴胺阳 1．1 动物 ：清洁级健康雄性大鼠60只，体质量200± 性对照组，每组 8只。运脾和络方高 、中、低剂量分别 15g，购于上海西普尔一必凯实验动物有限公司，许可证 lOg／kg／d、5g／kg／d、2．5g／kg／d，阳性 组 甲 钴 胺 用 号 ：SCXK(沪)2013—0016，每笼4只，自由饮水 ，室温22— 250mg／kg／d，模型组和正常组则灌服等量的蒸馏水，每 26℃。湿度45％～65％，每 日12h光照维持 ，昼夜循环 ，由 日灌 胃1次 ，连续灌 胃16周。 浙江中医药大学动物实验中心饲养及管理。 2．3 指标检测：分述如下。 1．2 药品与试剂：运脾和络方 (黄芪30g，赤芍 、苍术各 2．3．1 体质量及血液指标测定 ：称重后尾静脉采血，测 20g，金银花 、汉防己、当归各 15g，玄参 、威灵仙各 12g) 空腹血糖 ；给药结束后取血 ，E1isa法测血清GSH—PX、 由浙江省中药研究所制剂室提供：将全方药材粉碎成粗 SOD、MDA含量，运用公式计算GSH—PX、SOD活性。 粉 ，8倍水加减煎煮2次，每次1h，合并滤液，调整pH值 2．3．2 免疫组化法检测Caspase一3蛋白：采用WiVnt图 至中性，浓缩定容至生药含量 lg／ml的溶液，0．22um微 像分析系统在 ×200倍镜下对Caspase一3阳性结果进行 孔滤膜过滤除菌 ，分装后4~C保存备用。甲钴胺 ：0．5mg／ 半定量分析。每个标本随机观察5个视野 ，以阳性产物 片，北京星吴医药股份有限公司 ，生产批号 面积／视野面积表示该抗原的相对含量，取其平均值。 Caspase一3免疫组化试剂盒 ，兔来源多克隆抗体 ：美国 2．3．3 电镜观察 ：取大鼠坐骨神经 (长约lmm)，置于预 Promega公司；GSH～PX、MDAE1iS