糖代谢检验第三讲.ppt

糖尿病的实验室检查 一、血糖测定　　血糖测定是检查有无糖代谢紊乱的最基本和最重要的指标。　　（一）样本：血浆或血清。　　血糖测定一般可以测血浆、血清和全血葡萄糖。由于葡萄糖溶于自由水，而红细胞中所含的自由水较少，所以全血葡萄糖浓度比血浆或血清低10%～15%，且受红细胞比容影响。一般来说用血浆或血清测定结果更为可靠。除与标本的性质有关外，血糖测定还受饮食、取血部位和测定方法影响。餐后血糖升高，静脉血糖 毛细血管血糖 动脉血糖。所以如果不是特殊试验，血糖测定必须为清晨空腹静脉取血。　 　取血后如全血在室温下放置，血糖浓度每小时可下降5%～7%（约10mg／dl）左右；如立即分离血浆或血清，则可稳定24h。如不能立即检测而又不能立即分离血浆或血清，就必须将血液加入含氟化钠的抗凝瓶，以抑制糖酵解途经中的酶，保证测定准确。 （二）方法　　 1.氧化还原法：（Folin-Wu法）葡萄糖可使二价铜离子还原为一价铜离子，然后一价铜离子又可和某些化合物显色进行测定。葡萄糖与碱性铜试剂共热与磷钼酸成蓝色钼兰　　 该法易受血中其他还原糖的干扰，现已淘汰。　　 2.缩合法：邻甲苯胺法（0-TB法）　　利用邻甲苯胺类在酸性环境中可与葡萄糖醛基缩合成葡萄糖基胺，后者脱水生成Schiff氏碱，再经结构重排，生成有色物质。　　　　该法操作简便，灵敏度高，主要缺点是试剂腐蚀性大，邻甲苯胺被怀疑有致癌性，既有碍于健康又易损坏仪器。　　以上非酶法均为非特异性方法，由于非糖还原物质，如谷胱甘肽，维生素C、肌酸、肌酐、尿酸等也都能参与反应，可使结果比酶法偏高0.3～0.6mmol／L。 3.酶法：　　包括葡萄糖氧化酶-过氧化物酶（GOD-POD）偶联法、己糖激酶（HK）法和葡萄糖氧化酶-氧速率（GOD-OR）法。　　酶法采用特定的酶促生化反应步骤，因此具有特异性高。　　（1）葡萄糖氧化酶-过氧化物酶偶联法（GOD-POD法）：目前应用最广泛的常规方法。　　　　 （2）葡萄糖氧化酶-氧速率法（GOD-OR法）：　　葡萄糖氧化酶每氧化标本中的一分子葡萄糖便消耗一分子氧，用氧敏感电极测定氧消耗速率，便可知葡萄糖含量。此法准确性和精密度都很好，但只能用于特殊的分析仪。 （3）已糖激酶法（HK法）：是目前公认的参考方法。　　　　。 NADPH在340nm有吸收峰，其吸光度增加与葡萄糖浓度成正比。 　　该反应第一步不特异，任何己糖均可参与，第二步特异，只有G-6-P才能反应。　　评价：本法准确度和精密度高，特异性高于葡萄糖氧化酶法。干扰因素少，轻度溶血、脂血、黄疸、肝素、EDTA等不干扰测定 （三）参考值：3.89～6.11 mmol／L（65～110mg／dl）。　　（四）临床意义　　1.诊断高血糖症和糖尿病：　　血糖浓度7.0mmol／L（126mg／dl）称为高血糖症。引起高血糖症的原因很多，有生理性和病理性。　　2.诊断低血糖症：　　血糖浓度2.8mmol／L（50mg／dl），称为低血糖症。引起低血糖的原因很复杂，主要有：空腹低血糖、反应性低血糖、药物引起的低血糖等后述。 　习题12.在评价血糖测定时下列各项中错误的是　　A.标本尽量不要溶血　　B.血浆是测定葡萄糖的最好样品　　C.全血分析前放置一段时间会使结果偏低 　　D.无特殊原因，应空腹抽血测试 　　E.毛细血管内葡萄糖浓度低于静脉血葡萄糖浓度 　　 [　　『正确答案』E 二、尿糖测定　　（一）概述 　　正常人尿糖定性为（-），24h尿中排出的葡萄糖少于0.5g。当血糖浓度超过肾糖阈时，可在尿中测出糖。尿中可测出糖的最低血糖浓度（8.82～9.92mmol／L）称为肾糖阈。　　尿糖测定主要用于筛查疾病和疗效观察而不作为诊断指标。因为随着肾小球和肾小管情况的不同，肾糖阈会有变化，一般情况下糖尿病人血糖越高，尿糖也越多，可以从尿糖反映一定时间内葡萄糖从尿中流失的情况，但评价尿糖时一定要考虑肾糖阈的因素。 （二）方法：　　⒈班氏定性试验　利用葡萄糖或其它还原性物质在碱性高温环境中，将反应液中Cu2+还原为亚铜离子Cu+，形成黄色的氢氧化亚铜或红色的氧化亚铜。　　 2.葡萄糖氧化酶试纸法（干化学法）：反应原理同血糖葡萄糖氧化酶法。　　　尿中的葡萄糖被试条中所含的葡萄糖氧化酶氧化生成葡萄糖醛酸和H2O2，后者在过氧化物酶的催化下释放出氧，并使试条中的色原物氧化显色。根据显色的程度，可对尿葡萄糖作定性及半定量检测。　　（三）参考值　　尿糖试纸半定量法（-）：24h尿糖定量（葡萄糖氧化酶法）：0.5g／24h。 三、口服葡萄糖耐量实验（OGTT）　　（一）概述 　　1.糖耐量：指人体对摄入的葡萄糖具有很大耐