口蹄疫Asia Ⅰ型灭活疫苗免疫豚鼠的血清中和抗体产生情况.pdfVIP

中国畜牧兽医学会生物制品学分会第十次学术研讨会论文集 口蹄疫AsiaI型灭活疫苗免疫豚鼠的血清中和抗体产生情况+ 朱 刚1,2，黄炯2，¨，马文戈3，徐亚萍2，乌斯满江2，张读朴2 郭惠玲2，符子华3，胡 峻4，王 文4，赵海源2，叶德学2 3新疆畜牧科学院兽医研究所，新疆乌鲁木齐830000；4新疆兽医防疫监督总站，新疆乌鲁木齐830000) [摘要】为了探索口蹄疫苗效力检验的新方法，用口蹄疫亚洲I型灭活疫苗免疫豚鼠，免疫后20天心脏采血，以后每 I型中 隔15天采血一次，分离血清；采用固定病毒稀释血清的方法，通过乳鼠中和试验来检测免疫豚鼠血清中的口蹄疫Asia 和抗体产生与消长情况，用karber法计算中和效价，绘制动态曲线图。结果显示，免疫后的第35天，血清中和滴度平均值最 高，达596，随后开始下降，到免疫后的110天时，平均值降至112。 [关键词] 口蹄疫；亚洲I型；灭活疫苗；免疫；豚鼠；乳鼠中和试验 其传播速度快、流行范围广、侵害的动物种类多，被国际兽医局(OIE)列为A类疫病之首。历来受到各国政 府的密切关注，在世界上素有“政治经济病”之称，也被称为畜牧业的“头号杀手”。综观国际上防治FMD的 成功经验，用高效的疫苗对动物进行人工主动免疫是预防该病的有力武器。而FMD疫苗最突出的问题是它 的免疫效力问题。目前普遍使用半数保护剂量(PD∞)来评估疫苗的效力，具体方法是本动物接种疫苗21天 后，用强毒攻击，观察免疫动物、对照动物的发病情况，根据对照和免疫动物发病的数量计算每头份疫苗的 PD卯。这种检验方法需要大量的牛，劳动强度大，成本高，必须在生物安全三级的兽医动物实验室中进行。 同时，这种检验方法具有危险性和不易操作性。本试验以豚鼠为模型动物，对口蹄疫亚洲I型灭活疫苗免疫 豚鼠的血清中和抗体产生与维持情况做了初步的探索，试图用新的方法分析评价疫苗的某些质量指标。 1材料和方法 1．1材料 1．1．1 疫苗 口蹄疫亚洲I型灭活疫苗，由新疆天康畜牧生物技术股份有限公司生产，批号物 理性状检验和安全检验合格，效力达到4．25PDm 1．1．2病毒口蹄疫亚洲I型病毒，BHK21细胞培养的细胞毒液，自行制备。 1．1．3动物 1．1．3．13—413龄清洁级乳鼠购自新疆医科大学。 1．1．3．2体重350—4509豚鼠清洁级，购自新疆医科大学。 1．2试验方法 1．2．1豚鼠的免疫口蹄疫亚洲I型灭活疫苗免疫豚鼠，每只后肢肌肉注射疫苗0．3ml。 1．2．2血清的分离免疫豚鼠后第2013心脏采血，以后每15日采血一次，分离血清，一20。C保存待检。 1．2．3血清中和抗体效价的测定 1．2．3．1 口蹄疫亚洲I型病毒培养液的制备按常规病毒培养方法制备。 1．2．3．2 病毒含量测定将上述病毒液用PBS做10倍系列稀释，取适宜稀释度，各颈背部皮下注射3日龄 乳鼠四只，每只0．1ml。观察4～5天，根据乳鼠发病死亡情况，采用Reed—Muench法计算LD50¨J。 与等量的2倍系列稀释的待检豚鼠血清混合，37℃水浴1小时，每一稀释度颈背部皮下接种3—413龄乳鼠4 *作者简介：朱刚(1967年～)，男，硕士在读，高级兽医师，从事生物制品检验与开发工作。 #通讯作者 一15一 ofthe10th of AssociationofAnimaland Science Symposium Branch,Chinese Veterinary Proceedings Biolo$ical 乳鼠保护的最高血清稀释度即为该血清的中和效价…。 2结果 2．1 免疫豚鼠的血清中和抗体效价免疫的4只豚鼠定期采血后，分别进行中和抗体效价的测定。结果可 见，在免疫后的第35天，4只豚鼠的中和抗体效价都 700 达到了最高值，分别在126—596之间，随后开始下 篓黧 垃400 降，到110天时，分别降至27—128之间。4只豚鼠