JNK在惊厥持续状态幼年大鼠海马中的表达及依达拉奉对其的影响论文.docVIP

　　JNK在惊厥持续状态幼年大鼠海马中的表达及依达拉奉对其的影响论文 陆海燕，邓小龙，李光乾，李伟 【摘要】 目的 ：研究(JNK)在惊厥持续状态(SC)幼年大鼠海马中的表达及依达拉奉对其的影响。方法：雄性SD幼年大鼠120只分为正常对照组(NC组)、惊厥持续状态组(SC组)、依达拉奉组(EDA组)三大组;各大组均随机分为5组，分别于惊厥后4、12、24、48和72 h处死。采用氯化锂-匹鲁卡品法制作惊厥持续状态模型。EDA组在大鼠造模前三天予EDA腹腔注射，每天注射一次，连续3 d。TUNEL法检测观察大鼠海马细胞凋亡情况;免疫组化法检测海马p-JNK蛋白表达动态变化;RT-PCR技术检测海马JNK1 mRNA表达的动态变化。结果：SC组在惊厥12 h后的各时间点海马CA1区TUNEL阳性细胞数均显著高于NC组(P 0.01)，而ED组TUNEL阳性细胞数均较SC组显著下降(P 0.01或P 0.05)。幼年大鼠海马CA1区p-JNK蛋白在SC组表达显著增强.freelRNA表达明显高于NC组(P 0.01)，而在EDA组JNK1 mRNA的表达较SC组显著降低(P 0.01)。结论：SC可诱导JNK的表达，促进SC后海马神经元凋亡;EDA预处理可以影响JNK的表达，减轻惊厥后海马神经元凋亡程度。 【关键词】 惊厥;脑损伤;幼年大鼠;JNK;依达拉奉 Abstract: Objective: To observe the change of JNK in the hippocampus of status convulsive rat and the regulation effect of EDA on it. Methods: One hundred and tale Juvenile Sprague-Daly divided into normal control group (NC)， status convulsivus group (SC)， and edaravone group (EDA);and every group ly divided into five groups， Chloride and Pilocarpine. Group EDA ediated dUTP nick end labeling (TUNEL)，the changes of p-JNK protein in the hippocampus CA1 domains munohistochemistry(IHC)，the expression of JNK1 mRNA pus CA1 of SC group ore than that of NC group at 12 h after the SC(P 0.01). After the intervention of edaravone，TUNEL positive cells shopus CA1 domains increased markedly in SC group. The difference uch loRNA in the hippocampus in SC Group uch higher than NC Group (P 0.01)，and EDA group aybe increase the expression of JNK， JNK may be mediated to cell apoptosis. EDA can effect the expression of JNK， and lessen the pothology of hippocampus. Key RNA表达的变化，及依达拉奉对SC后海马JNK表达及神经元凋亡情况的影响，初步探讨JNK与惊厥性脑损伤的关系及依达拉奉在SC幼鼠中可能的神经元保护机制。 1 材料和方法 1.1 实验动物和试剂 清洁级健康幼年雄性Sprague-Dain，惊厥解除后状态良好的大鼠为合格SC大鼠模型。NC组：不作任何处理。EDA组：造模前3 d予EDA 3 mg/kg腹腔注射，每天注射一次，连续3 d，其余用药同SC组。 1.3 动物标本的制备 大鼠分别于惊厥后各时间点处死。经10%水合氯醛(350 mg/kg)腹腔麻醉后，断头剥离颅骨，完整取出脑组织置于冰盘上，分离右侧海马脑组织，放入去RNA酶的EP管中，迅速置于液氮中保存。左侧大脑在垂直视交叉处离断，并冠状位向后切取约5 mm，放入预冷的4%多聚甲醛固定12 h，入70%乙醇，送病理科进行石蜡包埋;石蜡包埋后制片，切片厚度为5μm。 1.4 实验方法 1.4.1 TUNEL检测凋亡细胞：具体操作步骤参照试剂盒说明书。二氨基联苯胺(DAB