實驗三 管柱層析與薄層層析 - 長庚大學 通識中心.PDFVIP

實驗三 管柱層析與薄層層析 目的：藉由管柱色層分析法來分離存在於蕃茄中的 Lycopene和β -carotene 並用 薄層層析法鑑定之。 原理： 除蒸餾、萃取和再結晶方法外，層析 (chromatography ，原義為色層分析) 亦 是一種高效率分離混合物的方法。在所有的層析分離法中，樣品皆溶於一個動相 （mobile phase ），它可以是一種氣體、液體或超臨界流體（supercritical fluid ）。 此動相接著被迫通入一個不互溶的固定相（stationary phase ）中，此固定相已被 固定於管柱內或一個固體表面上。這兩相的選取乃為了使樣品中的成份在動相與 靜相間有不同程度的分佈。假設 A 為極性較大的化合物、B 為極性較小的化合 物，A 、B 與固定相的吸引力以 A較強，故留置的時間長，所以 A 、B同時進入 固定相時，則 B 先離開固定相，A 次之，如此便達到分離的目的。由於流動率 （mobility ）不同的結果，樣品成份乃分離成若干不連續的層帶，因此可進而做 定性或定量分析。目前已有的層析法種類很多，例如:濾紙層析法(paper chromatography) ，管柱層析法(column chromatography) ，薄層層析法(thin-layer chromatography) ，氣相層析法(gas chromatography) ，高壓液相層析法(high pressure chromatography)及離子交換層析法 (ion-exchange chromatography) 等。 一、管柱層析： Liquid-Solid Chromatography 此種層析其動相為液體，固定相為細小顆粒之 固體，操作時將固體顆粒充填於管柱 中（所以又稱管柱層析 Column Chromatography ），由液體沖提過充填固體顆粒之管柱（所以液體稱為沖提液 eluting solvent ）來進行分離鑑定，如圖一。 固體顆粒表面以靜電力 (electrostatic forces)和凡得瓦而力 (van der Waals forces)吸附化合物，而沖提液對化合物有其溶解度，兩力的作用達到分離的目 的。現在用 K 表示此種作用 每單位表面面積吸附溶質之量  KA = 溶質在溶液中之濃度  化合物的結構、固定相之成分結構、沖提液的極性大小都會影響 K 值。當 化合物的結構與固定相之成分結構同是高極性時，因吸引力大故 K 值大，所以 留置管柱時間長 。若是化合物的結構與固定相之成分結構一是高極性、一是低極 性時，因吸引力小故 K 值小，所以留置管柱時間短。而沖提液是高極性時，其 作用大於吸附作用，即 K 值小所以留置管柱時間短。因此選擇適當的固定相及 合適極性的沖提液是實驗者必須訓練的技術。下面提供一些數據供參考： 12 A. 層析的固定相對極性化合物之吸附力大小 Activated alumina, charcoal ＞ Activated magnesium silicate ＞ Activated silicic acid （silica gel ） ＞ Inorganic carbonate ＞ Sucrose ，starch B. 沖提液之沖提力大小 Organic acid Alcohols ＞ Ketones ＞ Ethers ＞ Partially halogenated hydrocarbons ＞ Aromatic hydrocarbons ＞ Saturated hydrocarbons 沖提液 海砂