HPLC法测定益肝灵片中水飞蓟宾的含量论文.docVIP

　　HPLC法测定益肝灵片中水飞蓟宾的含量论文 【摘要】 目的 建立测定益肝灵片中水飞蓟宾含量的方法。方法 采用高效液相色谱法，色谱柱为Dikma Diamonsid C18柱，甲醇1%冰醋酸（体积比49∶51）为流动相，流速为1.0 mL·min-1，检测波长288 nm，柱温为30 ℃。结果 水飞蓟宾的质量浓度在20.68～82.72 μg·mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系，r＝0.999 9；平均回收率为97.5%，RSD为2.8%。结论 本文方法简便、快速、准确可靠.freeline the content of silybin in Yiganling tablets. Methods An HPLC method a DiamonsilC18 column. The mobile phase consisted of methanol1% acetic acid（49∶51）. The floL·min-1 and the detection . Results The linear ranges of silybin L-1（r=0.999 9）ethod is convenient, rapid and reproducible，eleon化学工作站;紫外分光光度计（日立U3210）；SK7200H型超声波清洗器（上海科导超声仪器厂），工作频率59 kHz，输出功率350 g/片）。甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为高纯水。 2 方法与结果 2.1 溶液的制备 2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取105 ℃干燥3 h后的水飞蓟宾对照品约10.34 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理20 min，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液（质量浓度为206.8 μg·mL-1）。 2.1.2 供试品溶液的制备 取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于水飞蓟宾10 mg），置50 mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理20 min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀；精密吸取上清液5 mL至25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45 μm滤膜过滤，作为供试品溶液。 2.1.3 阴性对照液的制备 根据处方配制阴性对照品，按“2.1.2”项方法处理得阴性对照液。 2．2 测定方法 由于水飞蓟宾对照品和供试品中都同时含有水飞蓟宾和异水飞蓟宾，因此按外标法以水飞蓟宾与异水飞蓟宾峰面积之和计算。 2.3 色谱条件及系统适用性试验 色谱柱为Dikma Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm，迪马公司）；流动相：甲醇1%冰醋酸溶液（体积比49∶51）；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：288 nm ；柱温：30 ℃。分别取对照品溶液（水飞蓟宾质量浓度为12 μg·mL-1）、供试品溶液和阴性对照溶液20 μL注入色谱仪，理论板数以水飞蓟宾计算应不低于4000；水飞蓟宾的拖尾因子为0.94，保留时间约为25 min，水飞蓟宾和异水飞蓟宾与其相邻色谱峰的分离度大于1.5；阴性样品不干扰样品测定，见图1。 2.4 方法学考察 2.4.1 标准曲线的制备 分别吸取一定量的水飞蓟宾对照品贮备液，加甲醇稀释成水飞蓟宾质量浓度为20.68、31.02、41.36、51.70、62.04、82.72 μg·mL-1的溶液。依次进样20 μL，每个浓度测定3次以上。以峰面积（A）对对照品溶液质量浓度（ρ）进行回归，得水飞蓟宾回归方程为A =667.95ρ+0.11，r＝0.999 9。表明水飞蓟宾质量浓度在20.68～82.72 μg·mL-1之间与峰面积线性关系良好。 2.4.2 精密度试验 取质量浓度为41.36 μg·mL-1的水飞蓟宾对照品溶液20 μL，连续测定5次，其峰面积的RSD值为2.0%，表明仪器精密度良好。 2.4.3 稳定性试验 取供试品溶液（批号：070303）在0、2、4、6、8、12、24 h 分别进样20 μL，记录峰面积，结果峰面积的RSD为1.1%，表明供试品溶液在24 h内稳定。 2.4.4 重复性试验 取同一批号（批号：070303）样品6份，照“2.1.2”方法处理并测定，结果水飞蓟宾平均含量为 6.45 μg·mL-1，RSD为1.5%，表明分析方法精密度良好。 2.4.5 加样回收试验 精密称取同一批号样品（批号：070303）共6份，精密加入水飞蓟宾对照品，照“2.1.2”方法处理并测定，计算回收率，结果水飞蓟宾平均回收率为97.5%，RSD为2.8%，表明本方法准确可靠，见表1。表1 水飞蓟宾回收率试验结果 2.5 样品测定 取益肝灵片3批，照“2.1.