蚓激酶重组逆转录病毒载体pLNBCPLKR的构建及其在奶牛乳腺组织中的表达.pdfVIP

116 中国奶业协会2007年会论文集 中国奶牛·20盯年增刊 蚓激酶重组逆转录病毒载体pLN—BCP—LKR的构建 及其在奶牛乳腺组织中的表达 周兴，张居农 (石河子大学动物科学技术学院，石河子832003) 中图分类号：$823．2文献标识码：A 000p．g、 2 样经FAPA法检测蚓激酶活性，结果表明牛奶具有明显的纤溶活性，即蚓激酶基因已经整合到奶牛乳腺组织并能 实现相对稳定的表达。 关键词：蚓激酶；重组逆转录病毒；包装；转染；表达 蚓激酶【”(LuIIlbrokinase，LK)，具有很强的纤维蛋白良好的前景。逆转录病毒M介导的基因转移技术是上 溶解活性，有溶解血栓和防止血栓形成的双重药理作 世纪80年代初建立起来的高效转基因方法，它借助逆 用，被广泛应用于心脑血管病的治疗。但目前蚓激酶的 转录病毒DNA载体与外源基因重组后经转染包装细胞 获得均是从蚯蚓体内直接提取，制备工艺繁杂，产量也 系产生缺陷型逆转录病毒，该病毒可以成功地感染靶细 很低。因此人们正在不断努力想利用基因工程技术生 胞，将外源基因整合于染色体基因组中，并得以在靶细 产大量高纯度的蚓激酶。动物乳腺生物反应器是一种 胞中表达。本实验以逆转录病毒为载体将蚓激酶基因转 有着广泛前景的动物转基因技术，自Gordono等首次应入奶牛乳腺组织进行了蚓激酶表达研究，为建立蚓激酶 用转基因技术在哺乳期小鼠的乳腺中表达出人组织源 乳腺生物反应器及大型转基因动物模型奠定了基础。 性纤溶酶原激活剂以来，利用乳腺生物反应器生产重 1材料与方法 要药用蛋白的优越性和可行性已达成共识，并展示了 1．1材料 l_lIl质粒、菌种和细胞 基金项目：国家“863”高技术研究发展计划(N以002“206653)基金资助。 作者简介：周兴(1979-)，男，硕士研究生．研究方向为动物遗传育种与繁殖。 DH5a菌 由本室构建，逆转录病毒载体pLNCL、E．coli 通讯储：张居农，r,houxl耐ove@126eonk, 积液与I型病例囊肿之积液的性质类似，为水样半透明 但非必然存在。由spiggs描述过的20个单角子宫颈 病例中，其中14例属于有正常的左侧子宫角而右侧子 的、黄色至红棕色的液体。 宫角缺如；反之有6例具正常右侧子宫角而左侧子宫 III型，特点为仅有一个狭窄或一个几乎无孔或完 角不存在。缺失子宫角的顶部呈囊状膨大。直径1．3— 全无孔的处女膜，生殖器官的其余部分则是正常的。由 1．5era或20era。不规则之子宫角的其余部分常为致密于处女膜异常，引起积液又因发情后的出血而使积蓄 而扁平之组织取代。其中2例单角子宫病例的宫颈大 之粘液呈琥珀至黑红棕色，量可多达9L。偶尔由于感 而厚，为稠密的粘液性团块状物所填充，恰象子宫颈 染，使无孔处女膜内保持着大量液汁。 塞，在其中的5个病例中，其囊肿的顶端或不完全的、 II型及III型病例有可能受孕，但I型病例绝不可能 有缺陷的子宫角内的粘液变干，色为黄褐至棕色，恰象 受孕。据称重庆市黄桷渡奶牛场兽医曾对IⅡ型无孔处女 一个致密的橡皮，在其变干之前为2—7个不规则形．直 膜病例以手术切开，再作人工授精而致其受胎。但按遗传 径1．3—2．5cm，周围为重油样粘液环绕，填充其间，此为学的原理，不应使II型及III型病例繁殖，以免秧及子孙。 细胞及无定形物质构成。在大多数病例中，其囊肿内之 参考文献(略)口 中国奶牛·2007年