牦牛Y染色体PCR扩增产物的克隆和测序.pdfVIP

中国奶牛·．7．007年增刊 中国奶业协会2007年会论文集 101 牦牛Y染色体PCR扩增产物的克隆和测序 王栋1，杨波1，朱化彬11郝海生1，易建红2，高福才z。罗应荣- (1．中国农业科学院畜牧研究所，北京100094；2河北省任丘市畜牧水产局。任丘062550) 中图分类号：$823．2文献标识码：A 文章编号：1004．-．4264(2007)Z122—0101-03 摘要：本试验采用牛的一_时Y染色体特异引物对牦牛基因组进行PCR扩增，检测到了牦牛公牛的一条特异性产 同源序列。该序列与本试验室所测得牛同一引物扩增产物的序列同源性为100％。 关键词：PCR，牦牛；Y染色体；序列 家畜性别的遗传基础一直是研究的热点和重点，随 采集本实验室试验牛场皮埃蒙特牛血样(1母，2公)i一 着研究的不断深人和分子生物学的迅速发展，发现了许 20℃保存备用。 多与动物性别决定有关的基因㈣，而这些基因的发现使 1．2基因组DNA的制备 得人们对性别的遗传机制有了逐渐深人的了解。目前。 在奶业生产中，通过对性别遗传基础的了解，采用分子 生物学技术进行遗传操作，正在逐步实现奶牛的性别控 制，这对奶业的发展具有重要意义，并正在成为奶牛胚 胎移植的一项配套技术目。 5min，取上清于另一离心管中即可用于PCR检测。或 牦牛是唯一能在海拔3500m以上的青藏高原及于一20。C保存备用。 其比邻高寒地区繁衍生活而延续的牛属动物品种，其 1．3引物 优良的适应性能及其独特的遗传基础是宝贵的遗传资 源。然而目前对牦牛基因组结构的研究较少Bm．对其性 2001)进行PCR检测，引物序列为： 染色体的研究就更少了。 本试验采用比较基因组学方法，利用牛的Y染色 体特异序列引物对牦牛基因组样品进行PCR检测，并 引物由上海博亚生物技术有限公司合成。 对PCR产物进行克隆测序，以期为深入了解牦牛的遗 1．4 PCR扩增的反应体系厦循环参数 传基础，更好的保护和利用牦牛宝贵的遗传资源提供 理论依据。 1材料与方法 KCl、0．1％TritonX一100、2mmol／L MgCl2、dN口(华美) 1．1血液样品的采集 200斗mol／L、上下游引物分别为200pm01]L。 于四川省九龙县随机选取4头牦牛(2公，2母)，颈 静脉采血，置于冰瓶带回实验室。一20qC保存备用。同时 次，然后72℃延伸5min，最后4。c保存。 1．5琼脂糖凝胶电泳检测 基金项目：国家高技术研究发展专项经费资助(课题号：2001AA到,3011) [SupportedbyNatictⅧ]Hi曲Teehnolo目ResearehandDevelopmeatPCR产物加入21xL琼脂糖上样缓冲液，在 取5／．LL 0f program China(No．2001AA243011)l 2％的琼脂糖凝胶上电泳，分子量标记同时上样电泳。采 作者简介：王栋(1968-)．男(汉族)．内蒙赤峰人，博士．副研究员。从事遗 用SYBRGreen I荧光染料进行染色，在紫外透射仪下 传育种与繁殖技术研究。Tel：010E—mail：dwangcn 检测PCR扩增结果。 2002@vlp．s