第二章基因工程-课件.pptVIP

工具酶种类: Restriction endonuclease DNA ligase DNA polymerase DNA prosessing enzyme 杂交位点（hybrid site）：同尾酶切割DNA产生的末端连接后所形成的新的位点。 焊死：同尾酶产生的粘性末端连接后，不能用任何一种酶酶切。 （5）识别位点在DNA分子中的频率 假定核苷酸随机排列，四碱基酶大约256个核苷酸有一个识别序列，而六碱基的酶大约有4096个核苷酸有一个识别序列。 λDNA长49kb，对于六碱基的酶应该有（ ）个切割位点？ 理论上有n个核苷酸的识别序列的酶出现概率为 （ ）。 （6）II型限制性内切酶酶解反应的条件 大部分需要相似的反应条件 Tris-HCl 50mM pH7.5 MgCl2 10mM 0-50mM 低盐酶 NaCl 0-150mM 50-100mM 中盐酶 DTT（二硫苏糖醇 ）1mM 100-150mM高盐酶 Volume 20-100ul T 37℃ 1 hr 二、平头双链DNA片段的连接操作 用末端转移酶在载体和双链DNA的3端各加一段寡聚核苷酸