细胞工程第一章细胞培养室的设置和准备工作.ppt

第一节 实验室的基本组成  细胞培养实验室应能进行6方面的工作：无菌操作、培养、制备、清洗、消毒灭菌处理、储藏 。 注意实验室生物安全，特别是含有病原体的生物材料的培养。 1、无菌操作室 (1)无菌操作室 :紫外线灯 （臭氧）电子灭菌灯 (2)净化工作台：超净工作台 （一）超净工作台 净化工作台使用注意事项 净化工作台使用注意事项 ④净化工作区内不应存放不必要的物品，以保持洁净气流流型不受干扰。 ⑤一般情况下，高效过滤器3年更换1次。 ⑥净化工作台使用完毕应及时清理工作台面上的物品并用75%乙醇擦洗台面使之始终保持洁净。 ⑦净化工作台应定期请专业人员进行功能测试。 简易无菌操作箱：在条件比较简单的实验室进行组织细胞培养实验，可以采用自制的单人或双人无菌操作箱。 箱内可安装紫外线灯供消毒灭菌和日光灯照明，操作时仅双手伸人箱内，亦可达到一定的无菌条件。 细胞培养实验室的设备 （三）干燥箱： 用于细胞培养的有些器械、器皿需要烘干后才能使用，玻璃器皿等须干热消毒。 鼓风式电热干燥箱。其优点是温度均匀、效果较好，缺点是升温过程较慢。 干燥箱160℃以上干烤2小时 升温时不能先升温后鼓风．面应鼓风与升温同时开始，至100℃时，停止鼓风。 应避免包裹器皿的纸或棉花烧焦，烧焦的碎屑会影响细胞的生长。消毒后，不能立即打开箱门以免骤冷而导致玻璃器皿损坏，应等候温度自然下降至100℃以下方可开门。 目前国内使用较多的是自动双重纯水蒸馏器(石英管加热)，使用方便、安全，蒸馏速度快。 （六）冰箱： 细胞培养室必须配备普通冰箱或冷藏柜及低温冰箱(-20℃)、超低温冰箱。前者用于储存培养液、生理盐水、Hanks液试剂等培养用的物品及短期保存组织标本。低温冰箱、超低温冰箱则用于储存需要冷冻保持生物活性及较长时期保存。 存放制剂：酶、血清等。 （七）离心机及天平： 进行细胞培养时，常规需要进行制备细胞悬液、调整细胞密度、洗涤、收集细胞等工作，通常需要使用离心机。 一般可常规配置4000r/min的台式离心机，例如细胞沉降，使用80—100g的离心力即可，离心力过大有时可能引起细胞的损伤。另外，可根据需要添置其他类型如大容量成或可调节温度的离心机等。 （九）滤器： 目前细胞培养工作中采用的培养用液，包括人工合成培养液、血清、消化用胰酶等常含有维生素、蛋白、脂肪、生长因子等物质，这些物质在高温或射线照射下易发生变性或失去功能，因而上述液体多采用过滤消毒以除去细菌。 目前常用的滤器有Zeiss滤器、玻璃滤器和微孔滤器。 细胞冷冻储存器： 细胞培养工作中常需储存细胞，常用的是液氮容器。液氮容器根据使用需要分为不同的类型及多种规格。 液氮容器的大小可为25-500 L，液氮温度可低达-196℃，使用时应防止冻伤。 加样器(移液器)：用于吸取、移动液体或添加样本，可根据需要调节量的大小，吸量准确、方便。 特别是微量加样器，可保证实验样品(或试剂)含量精确，重复性良好。可高温消毒、多通道的各类移液器可供使用者选择，能确保加样准确、快速、方便且达到无菌要求。 ⑤特殊设备 酶联免疫检测仪，可用于进行免疫学测定及细胞毒性、药物敏感性检测等； 旋转培养器； 荧光显微镜 流式细胞仪等 生物安全柜的选择 ④器械：主要用于解剖、取材、剪切组织及操作时持取物件。 A.手术刀或解剖刀、手术的或解剖剪(弯剪及直剪):用于解剖动物、分离从切剪组织，制备原代培养的材料； B.眼科虹膜小剪(弯剪或直剪)，用于将组织材料剪成小坎； C.血管钳及组织镊、眼科镊(弯、直)。用于持取无菌物品(如小盖破片)，央持组织等。 气套式加热和水套式加热 酸碱度（pH值：7.2-7.4） 稳定的温度（37°C） 较高的相对湿度（95%） 稳定的CO2水平（5%）： 红外传感器（IR）、热传导传感器（TC） 注意事项：压力、消毒、蒸馏水 显微操作仪 细胞核移植、染色体操作、显微注射、胚胎切割必需之设备 细胞电融合仪 采用高频交流波，使细胞排列成双体或串珠状，再使用直流方波长脉冲使细胞融合。 摇 床：进行细胞悬浮培养，水平往复式或回旋式 移 液 器液体试剂精确取量 电动移液器、微量移液器、 多通道可调式微量移液器 使用与校对 1、枪头：一次性 2、轴芯，密闭性 3、第一档、第二档（深入液体4毫米） 4、校对 培养用器皿： ①培养器皿：供细胞接种、生长等用的器皿，可由透明度好、无毒的中性硬质玻璃或无毒而透明光滑的特制塑料制成。 玻璃培养器皿的优点是多数细胞均可生长。易于清洗、消毒，可反复使用，并且透明而便于观察缺点是易碎，清洗时费人力。 塑料制培养器皿的优点是一次性使用，厂家已消毒灭菌密封包装，打开包装即可用于