大豆种子DNA的提取方法.pdf

大豆种子!# 的提取方法! $ $ $ 杨少辉 % 张丽娟% 段会军 % 张彩英 （$’ 河北农业大学农学院，保定()$(($ ；’ 莱阳农学院农学系，莱阳*+(( ） 摘要% 用大豆干种子和叶片分别为材料，进行以,-. 为目的大豆模板!# 的提取和分析。实验 结果表明：利用大豆干种子为材料，虽然在提取!# 量上比用叶片提取的少，但对,-. 扩增结果 没有影响。因此，用大豆干种子直接提取!# 可以节省育苗时间，获得完全可以满足试验要求的 大豆模板!# 。 关键词% 大豆；干种子；,-. ；!# 提取 中图分类号% / +*+’ $% % 文献标识码% #% % 文章编号% $((( 0 123$ （((4 ）( 0 ($+$ 0 (4 % % 在做,-. 试验时，首先面临的一个问题即是模 %每管加入+(( #7 +9E#- ，混匀，冰浴$( 分 板!# 的提取。对于大豆来说，一般实验室都是利 钟。 用幼苗叶片为材料，经液氮研磨提取!# 。此过程 38$((((;?5 ，离心 分钟。 必须要经过浸种催芽、幼苗培养、液氮研磨等过程， ’将上清液移入另一离心管中，加入等体积的 一般要用两周左右的时间才能进行!# 的提取并 氯仿0 异戊醇（3F $ ），颠倒离心管直至形成乳状 进一步开展实验。本方法用大豆干种子进行 !# 液不很快分层。 提取可在一天内提取试验需模板，从而节约了育苗 (383(((;?5 ，离心+ 分钟。 时间和液氮费用，具有简便、快速、经济等优点。 )将上清液移入另一离心管中，加入两倍体积 的冷乙醇，混匀，放置+ 0 $( 分钟。 $% 材料和方法 *离心得到!# 沉淀。:G 缓冲液溶解后再利 用氯仿0 异戊醇（3F $ ）和氯仿各重复提取一次。 $’ $% 材料 +风干!# 后，每管加入+( #7:G 缓冲液溶解 大豆干种子、育好的大豆幼苗。 沉淀，并于0 (8 保存。 $’ % !# 提取 $’ ’ % 叶片提取!# 方法 $’ ’ $% 干种子提取!# 采用周思君（$111 ）的方法进行大豆叶片的 对前人有关!# 提取方法进行了适当改进，具 !# 提取（用$’ +D /!/ 提取缓冲液）。 体步骤如下： $’ 4% 模板!# 的检测 !取大豆干种子两粒，去净种皮后在研钵中研 $’ 4’ $% 琼脂糖凝胶电泳检测 磨成粉末状。 取3 #7!# 溶液加$#7 上样缓冲液，在(’ 2D 琼脂糖凝胶上电泳。用 !# 作9@;HA; ，凝胶用溴 平分四份移至 $’ +56 离心管中，每管加入 , +( #7*+8 预热的/!/ 提取冲液（$((59 :;= 0 -6 化乙锭染色，在紫外灯下观察电泳结果。 （?2’ ( ），+((59 @-6 ，+(59 ABC@ ，3D /!/ ），混 $’ 4’ % ,-. 检测 匀。浸软后再加入3+( #7 缓冲液，混匀。 将提取的样品 !# 溶液稀释 $( 0 +( 倍后作