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苦苣菜水提物抗急性炎症活性及其机制探究 　　[摘要] 目的 分析苦苣菜水提物??机体炎症相关通路的调节作用，并进一步对作用机制进行研究。方法 取雄性健康昆明种小鼠100只进行耳肿和足肿实验，按随机数字表法分为每组10例，分别为模型组、地塞米松（2 mg/kg）阳性药物组（阳性对照组）、苦苣菜水提物0.26 g/10 g剂量组（高剂量组）、苦苣菜水提物0.13 g/10 g剂量组（中剂量组）、苦苣菜水提物0.065 g/10 g剂量组（低剂量组）。检测不同组间血清及炎性组织液中环氧化酶（COX-2）、p38丝裂原活化蛋白酶（p38 MAPK）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及白介素-6（IL-6）水平。结果 不同剂量组间小鼠耳廓肿胀与足跖肿胀度均存在差异（P 　　[Key words] COX-2； p38 MAPK； TNF-α； IL-6 苦苣菜（Sonchus oleraceus L.）又名苦菜、滇苦菜、苦荬菜等，属菊科，苦苣菜属。苦苣菜属植物的主要活性成分是倍半萜类和黄酮类，此外，还有香豆素类、甘油酸酯苷类、木脂素类等。苦苣菜及提取物具有降血糖、降压、降脂、利尿、保肝、抗肿瘤等多种药理作用[1]。近年来，动物实验发现苦苣菜属植物可明显抑制动物耳肿、足肿，并能抑制腹腔毛细血管通透性的增加，证明其具有抗菌、抗炎作用[2]。在临床也常与其他中药配伍用于治疗肠胃炎、肺热咳嗽、咽喉肿痛等多种炎症性疾病。抗炎机制涉及到抗氧化、减少一氧化氮（NO）生成、抑制凋亡等多方面内容，机制复杂，因此目前尚缺乏系统的阐明[3]。本课题旨在通过二甲苯致小鼠耳廓肿胀和角叉菜胶诱导小鼠后足跖肿胀建立急性炎症模型，研究苦苣菜水提物对多种急性炎症的拮抗作用，并通过检测小鼠炎性组织液和血清中环氧化酶-2（COX-2）、p38 丝裂原活化蛋白酶（p38 MAPK）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）等多种炎症相关因子的含量变化，进一步探讨苦苣菜水提物对这些细胞因子、炎性介质的影响，对机体炎症相关通路的调节作用，初步分析苦苣菜水提物抗炎免疫活性的有关机制，为防治炎症性疾病提供新的思路 1仪器与材料 1.1主要仪器 Sigma4-15高速冷冻离心机（德国Sigma公司），Tecan Safire2酶标仪（意大利Tecan公司），LE225D电子天平（德国Sartorius公司），RE-52AA旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），电热恒温水浴锅（北京精科华瑞仪器有限公司）等 1.2主要试药 二甲苯分析纯（天津市永大化学试剂有限公司，批，角叉菜胶（德国Sigma公司，批号127H1227），COX-2酶联免疫吸附测定法（Enzyme- Linked Immuno Sorbent Assay，ELISA）试剂盒、p38 MAPK（ELISA）试剂盒、TNF-α（ELISA）试剂盒、IL-6（ELISA）试剂盒（北京冬歌生物科技有限公司）。苦苣菜采自内蒙古土默特左旗田间，经内蒙古医科大学生药学教研室青梅、庞秀生教授鉴定 1.3 实验动物 雄性健康昆明种小鼠100只，体重20～22 g，2～3月龄，由中国食品药品检定研究院提供，均为无特殊病原体动物（SPF），合格证号：SCXK（京）2014-0013。饲养于室温（23.0±2.0）℃、湿度40%动物室内，自由摄食，饮水，1周后用于实验，至实验时体重为30～35 g。该研究经动物医学伦理委员会批准通过 1.4苦苣菜水提物的制备 取苦苣菜全草，阴干，剪碎，称取原生药130 g，加适量水浸泡30 min，按照1∶10固液比加水，煎煮60 min，收集滤液Ⅰ，滤渣加适量水煎煮45 min，得滤液Ⅱ，合并滤液Ⅰ、Ⅱ，经减压浓缩，得1.3 g/mL浓缩液100 mL，冷却，置于4℃冰箱中备用 1.5 分组与给药 采用随机数字表法将小鼠随机分成10组（n=10），5组进行耳肿实验，5组进行足肿实验。两组实验中均根据用药不同设置模型组、地塞米松（2 mg/kg）阳性药物组（阳性对照组）、苦苣菜水提物0.26 g/10 g剂量组（高剂量组）、苦苣菜水提物0.13 g/10 g剂量组（中剂量组）和苦苣菜水提物0.065 g/10 g剂量组（低剂量组）。各组均采用灌胃（ig）给药，给药前夜禁食不禁水，给药容量按体重计算0.2 mL/10 g，连续给药5 d。苦苣菜水提物各剂量组分别给予相应浓度的苦苣菜水提物，阳性对照组给予地塞米松磷酸钠溶液2mg/kg，模型组则分别给予等量生理盐水 1.6 急性炎症模型的制备方法 二甲苯致耳肿胀模型：末次给药30 min后，于每只小鼠右耳内外两侧各均匀涂抹 100%二甲苯0.02 mL。致炎30